霍乱弧菌基因组中非编码DNA功能的初步研究(3)
在霍乱弧菌基因组中存在着大量未研究的非编码DNA，因此我们推测霍乱弧菌中占有相当大比例的间隔序列也存在着相应的功能。我们通过网站对霍乱弧菌基因组进行比对筛选得到10段大小超过1000 bp保守性较高的非编码DNA，通过框内敲除成功得到四个非编码基因的敲除菌株∆VC0388。5、∆VC0548。5、∆VCA0390。5、∆VCA0884。5。在后续实验中我们通过生物膜实验研究这些敲除菌株在成膜能力上的差异；通过在LB培养基以及M9培养基中生长曲线的制作中研究敲除菌株生长繁殖能力的差异；通过观察各菌株对过氧化物形成的抑菌圈大小得到菌株对于过氧化物的敏感程度；研究这些敲除株在毒力表达上的差异，将霍乱弧菌主要的毒力基因tcpA的启动子区域连接到载体pBBRLux，再转化到野生型以及各敲除菌株上，通过冷光值的检测来研究这些菌株在毒力表达方面上的缺陷。
1材料
1。1供试菌株与质粒
实验供试菌株及其特性见表1-1[18,19]，实验中菌株Vibrio cholerae C6706 Genbank号为AE003852 ，对于我们要研究的间隔序列，如位于VC0388~VC0389之间，特别的将其命名为VC0388。5。