粪产碱杆菌NicA基因的烟酸降解功能鉴定(3)
1 材料与方法
1．1 试剂、仪器及培养基
1．1．1 试剂及所用仪器
本实验室已发现粪产碱杆菌ZD05(Alcaligenes faecalis ZD05)中有烟酸代谢的调控基因簇 Nic A，并已提取了其基因组DNA。
大肠杆菌（Escherichia coli DH5α）购于南京百斯凯科技有限公司；申氏杆菌（Shinella sp HZN7）由本实验室筛选获得。载体质粒MCS2，具有Km抗性，为本实验室保存。
抗生素氨苄青霉素（Ampicillin，Amp）、卡那霉素（Kanamycin，Km)购于上海生工生物工程股份有限公司；本文中所用抗生素的工作浓度分别为：氨苄青霉素(Amp)，100 mg/L；卡那霉素(Km)，100 mg/L；
DNA凝胶回收试剂盒Gel/PCR Extraction Kit、质粒小提试剂盒Plamid Miniprep Kit、转染试剂盒LipofectaminTM 2000（购自生工生物工程公司）；
主要仪器：高速离心机（CT15RT）；紫外扫描仪（JASCO V-550, Japan）；电泳仪（Tanon EPS300）；恒温水浴锅（DK-8D）；PCR仪（Bioer XP Cycle）；恒温振荡摇床（IS-RSD3）；超净工作台（AIRTECH）；移液枪（Eppendorf）；超低温冰箱（MDF-382E(CN)）；
PCR引物合成于南京金斯瑞生物科技有限公司。
Taq DNA聚合酶、DNA克隆T载体（pMD18-T）和T4连接酶购于大连宝生物工程有限公司。
1．1．2 培养基
无机盐培养基（Mineral Salts Medium，MSM）：1.5 g/L K2HPO4，0.5 g/L KH2PO4，0.2 g/L MgSO4•7H2O，1.0 g/L NH4NO3，1.0 g/L NaCl及1 ml/L微量元素溶液。用双蒸水定容至1 L，pH 7.0~7.5。
LB培养基（Luria-Bertani medium）：10.0 g/L 蛋白胨，5.0 g/L 酵母膏，和10.0 g/LNaCl，双蒸水定容至1 L，pH 7.0。
以上培养基均经过高压蒸汽灭菌（121℃，30 min）。固体培养基添加1.5%（w/v）的琼脂。