摘  要农杆菌有根癌农杆菌和发根农杆菌两种类型，农杆菌对于植物转基因而言是一种重要的工程菌。发根农杆菌K599是代表性的发根农杆菌菌株，携带有内源性Ri质粒pRi2659，其质粒上只有单一的T-DNA区，而T-DNA区依次含有orf3等共11个基因。已有研究表明，rolA (又称为rolα)、rolB (又称为rolβ)和rolC (又称为rolγ) 3个基因与K599侵染植物诱导毛状根形态构成以及发育有关，cus基因为黄瓜碱合成酶基因。但迄今发根农杆菌K599 T-DNA上orf3的功能尚不清楚。利用根癌农杆菌转基因的技术将K599 T-DNA上orf3基因转入烟草，并获得了转基因烟草植株。本研究进一步对获得的转基因植株进行Southern blot分析，并对获得的转基因后代进行遗传分析，以期全面分析K599-orf3基因对调整植物生长发育的功能。90038

Abstract Agrobacterium has two types of Agrobacterium tumefaciens and Agrobacterium rhizogenes。 Agrobacterium is an important engineering bacterium for plant transgene。 Agrobacterium rhizogenes K599 is a representative Agrobacterium rhizogenes strain carrying the endogenous Ri plasmid pRi2659。 The plasmid has only a single T-DNA region, and the T-DNA region contains 11 genes。 Studies have shown that rolA (also known as rolα), rolB (also known as rolβ) and rolC (also known as rolγ) 3 genes associated with K599-infected plants induce hairy root morphology and development, cus gene for cucummopine synthase gene。 But so far Agrobacterium rhizogenes K599 T-DNA orf3 function is not clear。 The transfection of orf3 gene on K599 T-DNA was transferred into tobacco using Agrobacterium tumefaciens transgenic technology, and transgenic tobacco plants were obtained。 In this study, the transgenic plants were analyzed by Southern blot, and the transgenic progeny were analyzed by genetic analysis to analyze the function of K599-orf3 gene in regulating plant growth and development。源Q于W优E尔A论S文R网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201,8766

毕业论文关键词： orf3基因；克隆；转基因；功能

Keyword: orf3 gene; cloning; transgenic; function

目  录

摘  要 2

Abstract 2

目    录 3

1 材料与方法 4

1。1 实验材料 4

1。2 转orf3基因烟草的普通PCR检测 4

1。2。1 转orf3基因烟草植株DNA的提取 4

1。2。2 PCR扩增反应及产物鉴定 5

1。3 DNA的酶切、电泳 5

1。4 DNA的southern转移 6

1。5 探针的制备 6

1。6 杂交筛选 6

1。7 洗膜 7

1。8 荧光显色 7

1。9 暗室洗片 7

1。10 转orf3基因烟草的表现型的观察及株型分析 7

2 结果分析 8

2。1 转orf3基因的烟草植株再生 8

2。2 转orf3基因烟草表现型的观察结果 9

2。3 Southen blot分析结果 11

3 讨论 11

参考文献 12

致谢 13

引  言

农杆菌有根癌农杆菌和发根农杆菌两种类型，农杆菌对于植物转基因而言是一种重要工程菌。发根农杆菌侵染植物细胞诱导产生转基因毛状根。发根农杆菌K599是代表性的发根农杆菌菌株，其含有内源性Ri质粒pRi2659，只有单一的T-DNA区。T-DNA区依次含有orf2、orf3、orf4、orf8、rolA、rolB、rolC、rolD (orf13)、rolE (orf13a)、orf14和cus共11个基因/编码区。已有研究表明，rolA (又称为rolα)、rolB (又称为rolβ)和rolC (又称为rolγ) 3个基因与K599侵染植物诱导毛状根形态构成以及发育有关，cus基因为黄瓜碱合成酶基因(Failla et al, 1990; Serino et al, 1994)。其它种类的发根农杆菌中的rolA、rolB、rolC以及roD等同源性基因也呗证明了与毛状根的形成有关联(Casanova et al, 2005)。Hansen等(1994)报道甘露碱型发根农杆菌 8196中rolE (orf13a)为一类调控蛋白来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766 。Otten and Helfer (2001) 报道，发根农杆菌A4 orf8影响植物体内糖的代谢，Umber等(2005)报道转A4 orf8烟草植株变矮、出现杂色。目前发根农杆菌K599 T-DNA上orf3的功能尚不清楚，为此，本研究首先克隆K599 T-DNA orf3，并探究其在植物体内的功能。