抗生素很好的解决了这个问题,但由于全球抗生素药物的滥用,抗生素在畜禽产品中的残留、细菌耐药性、过敏反应和环境污染等问题日渐严重,因此开发新型安全的抑菌物质以替代传统抗生素和杀菌剂逐渐成为研究的热点。例如屎肠球菌KQ 2。6抑菌活性物质可对大肠杆菌细胞膜产生不良影响,增加细胞膜的渗透性,同时会结合或破坏大肠杆菌的DNA,影响DNA的正常代谢功能,从而引起大肠杆菌死亡[4]。董周永[5]以食品中的常见污染菌为供试菌,以抑菌圈直径为活性追踪指标,研究石榴果皮,实验结果表明,石榴果皮提取物抑制了菌体的HMP途径,引起代谢功能障碍。
通常研究的新型安全抑菌物质是细菌或真菌的代谢产物或菌种经传代培养繁殖过程中分泌出来的细菌素等物质,也可从其他植物或者土壤中分离出来。为了研究物质的抑菌现象,我们通常采用牛津杯法。孟兆丽 [6] 等采用牛津杯法研究了蛹虫草多糖乙醇分级沉淀物的抑菌效果,结果表明蛹虫草多糖对金黄色葡萄球菌、四联球菌等革兰氏阳性菌的生长具有抑制作用。刘冬梅[7]等用琼脂扩散法的牛津杯法评价益生菌的抑菌活力,当牛津杯中的加液量为0。25 ml,指示菌菌悬液的细菌浓度为105 CFU/ml,在3~4 ℃冰箱预先扩散24 h,可以得到清晰可见的抑菌圈。我们不难发现不同物质,针对同种指示菌抑菌圈的直径大小可能不同;同种物质,针对不同的指示菌抑菌圈的直径也是不同的。因此为了探究抑菌物质对不同指示菌的抑菌活性,将不同种类的指示菌的抑菌情况收集在一起,不断完善该物质的抑菌谱。
土壤中拥有多种微生物,本课题从土壤中筛选出具有抑菌活性的菌种,通过16s-rDNA分子生物学鉴定其种属,测定所得到片段的DNA序列,用MEGA6。0软件将所获得的序列与其他序列相比较,并用序列构建系统发育树;通过发酵培养收集该菌种的代谢产物,选择常见的菌种作为指示菌,进行抑菌谱的研究,为研究新型抑菌剂以及抑菌产品的开发研究提供参考。
1。材料与方法
1。1材料
1。1。1试验菌种
试验菌种:土壤中分离,命名为28-1-1。
表1实验菌种
实验菌种 拉丁文名 来源来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766
大肠杆菌 Escherichia coli 实验室312提供
枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis 实验室312提供
蜡样芽胞杆菌 Bacillus cereus 实验室312提供
金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 实验室312提供
化脓链球菌 Streptococcus pyogenes 实验室312提供
乙型副伤寒沙门氏菌 Salmonella paratyphi 实验室312提供
铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa 实验室312提供
肺炎克雷伯氏菌 Klebsiella pneumoniae 实验室312提供
粪肠球菌 Enterococcus faecalis 实验室312提供
白色念珠菌