摘要LeSPL-CNR属于SBP-box转录因子家族，在调控番茄果实成熟发挥重要作用。因此，检测LeSPL-CNR本身的转录活性，将有助于阐明LeSPL-CNR在番茄果实成熟中的调控机制。 本研究通过PCR技术扩增番茄转录因子LeSPL-CNR全长cDNA序列、靠近N端序列、编码SBP-box序列和C端的序列，并将上述片段克隆入酵母诱饵载体pGBKT7并测序验证。然后，利用酵母系统，将上述重组酵母质粒BK-CNR，BK-NRT，BK-SBP，BK-SC和BK-CRT转化菌株HA109，分别涂布在SD/-Trp和SD/-Trp-His的平板上培养3-5天，结果发现，不论是连入LeSPL-CNR cDNA全长还是部分片段的pGBKT7重组质粒均无法激活酵母菌株AH109体内的His3基因表达，因此，与转化空载体pGBKT7的阴性对照相比，含有重组质粒的酵母菌株可以在SD/-Trp培养基上良好生长，但无法在SD/-Trp-His的培养基上生长（图3），说明番茄转录因子LeSPL-CNR不具有转录自激活活性。89401

毕业论文关键词：番茄； LeSPL-CNR;  转录活性； 酵母系统

Abstract LeSPL-CNR belongs to the family of SBP-box transcription factors and plays an important role in regulating tomato fruit ripening。 Therefore, detecting the transcriptional activity of LeSPL-CNR will help to elucidate the regulatory mechanism of LeSPL-CNR in the process of tomato ripening。 To investigate the transcriptional activity of LeSPL-CNR, the sequences encoding full-length LeSPL-CNR, the N terminal, the SBP-box domain and the C terminal were amplified respectively, and then cloned into the yeast bait plasmid pGBKT7 and verified by sequencing。 The recombinant plasmid BK-CNR, BK-NRT, BK-SBP, BK-SC and BK-CRT was transferred into the yeast strain AH109, respectively, and cultured SD/-Trp minimal medium and SD/-Trp-His minimal medium for 3-5 days。 The results showed that either the full-length nor the partial fragments of LeSPL-CNR can not activate the gene expression of His3 in the yeast strain AH109, therefore, these yeast strains grew well on the SD/-Trp medium, but not on the SD/-Trp-His medium, which suggested that transcription factor LeSPL-CNR is not autonomously activated。

Keyword: tomato;  LeSPL-CNR;  transcriptional activity;  yeast system

目    录

1。 引    言 5

2。 材料与方法 6

2。1 实验材料 6

2。2 实验试剂 6

2。3 目的基因克隆 6

2。4 酵母载体构建 6

2。5 利用酵母系统检测源Q于W优E尔A论S文R网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201,8766 转录活性 7

3。 实验结果 8

3。1 RT-PCR克隆目的片段及酶切处理 8

3。2 菌液PCR检测 9

3。3 LeSPL-CNR转录活性 9

4。 讨    论 10

5。 参考文献 11

附 录 1：常用试剂及配方 12

致    谢 13

1。 引    言

蔬果是人类饮食中最重要的组成部分之一，饮食中蔬果的匮乏是导致人类患病死亡的十大诱因之一，因此关于果实生长、发育成熟调控机理的研究已经成为重大课题。番茄（Solanum lycopersicum）是茄科茄属番茄亚属的多年生草本植物，因其生长期相对较短，种进化史长，具有高的营养价值和商业效益，现作为重要的食用蔬果在全球广泛种植。不仅如此，瞬时表达、稳定转化、变体库、高密度遗传图谱、EST资源及全基因组测序完成也促使番茄成为肉质果实发育和成熟的模式植物[1]。