摘 要： 选取一株实验室保藏的具有产内切葡聚糖酶（endoglucanase）活力的重组巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株作为研究对象，对其发酵条件进行研究。培养基以pH为6。0的磷酸缓冲液作为溶剂，通过改变培养基中氮源及碳源，扩大培养及发酵生产得到内切葡聚糖酶，获得的发酵液经过离心取上清液，对其用CMCA-DNS法测量540nn处吸光度，结果表明重组巴斯德毕赤酵母产内切葡聚糖酶最适宜温度为25℃；连续培养到第三天时酶活力达到最高；最优氮源为硫酸铵，最碳糖原为蔗糖。80053

毕业论文关键词：巴斯德毕赤酵母，内切葡聚糖酶，优化

Abstract: Strain Pichia pastoris which is capable of producing endoglucanase was stored in the laboratory。 Conducted research through its fermentation conditions,using fermentation conditions of production of endoglucanase。The phosphate buffer as a solvent and has a pH of 6。0。 By changing the medium nitrogen source and carbon source, using the optimal expand training and fermentation conditions of production of endoglucanase, the fermentation broth obtained after centrifugation, and its absorbance at 500nn was measured by CMCA-DNS method, the results showed that: the optimum enzyme producing endoglucanase temperature is 25℃;continuous culture enzyme highest vigor when the third day;suitable nitrogen source is ammonium sulfate; the optimum carbon source is sucrose。

Key words: Pichia pastoris，endoglucanase，optimization

目   录

1  前言 7

1。1  毕赤酵母表达系统特点及应用前景 7

1。2  重组巴斯德毕赤酵母 7

1。3  内切葡聚糖酶简介 8

2  材料和方法 8

2。1  菌株 8

2。2  培养基 8

2。3  主要试剂 9

2。4  主要仪器 9

2。5  内切葡聚糖酶的制备 10

2。5。1  产酶条件比较 10

2。5。2  发酵液制备及上清液提取 11

2。6  酶活力测定 11

2。6。1  酶活力测定原理 11

2。6。2  酶活力测定过程 12

2。6。3  酶活力计算 12

3  结果与分析 14

3。1  产酶条件研究 14

3。1。1  培养时间的选择 14

3。1。2  培养成分碳源选择 14

3。1。3  氮源选择 15

3。1。4  温度选择 16

3。1。5  碳源含量选择 16

3。1。6  氮源含量选择 17

4  实验问题总结与改进方式 17

结  论 18

参考文献 19

致  谢 21

1  前言 

 巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）作为外源基因表达的优良生物反应器，近年来得到分子生物学及其他领域的广泛的关注和应用[1]。毕赤酵母作为一种甲基营养型酵母[2]，K可以利用甲醇作为唯一碳源进行代谢，特别是在在缺乏如葡萄糖和甘油等一类抑制性碳源时，这一特点得到展现。论文网