摘要纳米抗体又被称为重链单域抗体(VHH), 是现在可以得到的较为稳定、可结合抗原的最小抗体功能单元。由于相对分子质量小、稳定性强、可溶性好、抗原结合性能好、易表达及免疫原性低等特点, 是临床检验试剂盒和分子影像研究中的重要靶分子, 具有广阔的应用前景。本实验前期依据CysC（胱抑素C）抗体结构,设计化学合成一系列的oligo并通过PCR的方法拼接构成CysC的纳米抗体序列,构建质粒pET32a-14GS0584-6, 并转入大肠杆菌进行表达。本实验以诱导剂IPTG浓度、诱导时间和温度为影响蛋白表达因素,摸索不同条件时CysC的抗体表达量,并探索蛋白纯化的条件,以便于后续应用于血浆CysC检测的试剂盒研制。实验结果表明CysC抗体蛋白在大肠杆菌主要以包涵体形式表达, 诱导剂IPTG浓度0。6mM,诱导温度37°C、诱导时间为8h时CysC抗体蛋白产率是最高的;包涵体溶解后采用亲和层析纯化，蛋白纯度90%以上。73657

毕业论文关键词：胱抑素C   纳米抗体  大肠杆菌    IPTG

毕业设计说明书外文摘要

Title  Expression and purification of recombinant human cystatin C  Antibody  in Escherichia coli                             

Abstract Nano antibody is also known as heavy chain single domain antibodies, now available with complete function, stable and the minimum unit can be combined with the antigen。 Because of the small relative molecular mass , strong stability and good solubility，and antigen combined with good performance, easy to express and low immunogenicity, it is important in the study of clinical testing kits and molecular imaging target molecules, has a broad application prospect。 In the early time, a series of oligo were designed and synthesised based on CysC antibody structure, and they were spliced to construct the plasmid pET32a-14GS0584-6。 To explore the different expression condition of CysC nanobody expression in E。Coli, the inducing IPTG concentration, time and temperature were studied as the factors of affecting protein expression。 The results of experiment show that CysC antibody protein were mainly expressed in the form of inclusion body in E。 coli。, when inducer IPTG concentration is 0。6 mM, induction temperature 37 ° C, induction time for 8 h, CysC antibody protein was expressed in the highest yield 。The protein purity was over 90% by nickel column affinity chromatography。 

Keywords  Cysc  Nanobodies  E。Coli  IPTG 

目   次

1  绪论 1

    1。1 CysC在临床疾病检测中的应用   1

  1。2 重链单域抗体及其应用1

2  材料和试剂 4

3  主要仪器 6

4  原理和方法  7

  4。1 CysC的抗体表达条件研究 7

  4。1。1实验原理 7

  4。1。2 实验设计8

  4。1。3 实验方法9

  4。1。4 结果与讨论 11

 4。 2  抗体蛋白纯化14

  4。2。1 实验原理14

  4。2。2 实验方法15

  4。2。3结果15

结论  16

致谢  18

参考文献20

附录A    21

1 绪论

1。1 CysC  在临床疾病检测中的应用 

肾脏是人体排泄系统的最重要器官，肾脏具有泌尿功能，可排除代谢终产物、过剩的电解质，可调节细胞外液量和血液的渗透压，对维持机体水、电解质、酸碱平衡具有重要作用。

最普遍的衡量肾功能的指标一般分为两种——一种是肾小球滤过率,还有一种是滤过分数。肾小球滤过率(GFR,glomerular filtration rate)是指单元时间段大约60s，两肾所生成滤液的量,正常成人为每分钟生成80-120ml左右,据完全统计，有1/5流经肾的血浆由肾小球滤入囊腔生成原尿。在临床上，内源性标志物是监测肾小球滤过功能过程中最常用的指标物质。