重链抗体(heavy chain antibody,HcAb)只存在于部分动物体内,是一种只依靠重链组成的新型分子抗体。单域抗体(single-domainantibody)是一种含约110个氨基酸的肽链,并且与抗体一样拥有一个重链可变域(VH)。

单域抗体对天然蛋白的亲和力,优越的识别能力,使其应用范围更广[8]。科研人员在研究中发现,有三分之一的概率在90°C(194°F)的时仍维持其相对活性[9],这使得单域抗体比普通完整抗体更具有优越性。重链单域抗体和普通抗体对抗原的专一性与完整的抗体相当,但相对于一般抗体而言,单域抗体不仅分子质量小且拥有更好的热稳定性,可在清洁剂影响和高浓度尿素条件下维持稳定,还克服人源抗体改造后的不足之处,如亲和力低、易聚集等等,从而成为抗体药物研究领域的一颗新星。

此外，微小的分子质量也为单域抗体带来了众多福音,不仅使其更易表达,也使得其渗透性好于普通抗体,可以穿过普通抗体无法通过的物理屏障,结合一些普通抗体无法结合的隐蔽表达位置和特殊结合位点。各项实验证明,某些单域抗体,例如来自于骆驼和鱼身上的单域抗体,可结合一般抗体无法接触的隐藏抗原,此类抗体脂溶性较差,却更易溶于水,这是因为重链抗体空间结构中互补决定区的第三个转角遮挡了亲脂点位[10]。和普通的抗体相比,重链抗体虽缺失轻链,却保留着结合抗原的能力,这就说明,我们可以通过基因工程获得只拥有可变区却不影响结合能力的新型工程抗体。

以下是一些关于单域抗体优越性的研究案例,由此可以看出单域抗体对于未来科学技术和人类生活的影响。文献综述

Muruganandam2002年在动物模型脑内首次发现单域抗体,由此可以推测这种小分子有能力穿透血脑屏障[11]。另外一些实验室通过阳性筛选得到了对蝎子毒素具有高亲和力的单域抗体分子,由此可以证明这种分子具有不同于常规抗体的结构,也是由于这种特殊结构的影响,单域抗体更易结合普通完整抗体无法结合的隐藏的表位。[12]单域抗体还可以中和清除许多如肉毒素B和葡萄球菌肠毒素B之类的细菌毒素,上述实验中的肉毒素B和葡萄球菌肠毒素B都来自于非免疫抗体库[5]。而另一种已处在临床试验阶段,对于生物工程市场跃跃欲试LX-0081单域抗体可以与血管性血友病因子(vWF)、磷脂(PL)等进行特异结合,从而避免因血栓导致的急性冠脉综合征[13],消除了当今社会一些常见病种的隐患,提高人类生活水平与质量。

在第一期试验成功举行后,科研人员凭借此发现,再次于2009年9月,对高风险冠状动脉再成形术展开了2期临床试验。同期,Ablynx公司[14]根据其可通过血脑屏障,并易渗透到大型肿瘤中的特性推断,未来可开发出治疗脑肿瘤的单域抗体药物。

本选题利用大肠杆菌直接表达Cys C抗体,避免了动物免疫、细胞融合、制备杂交瘤细胞、动物体内诱生腹水等一系列繁琐的实验来获得单克隆抗体,从而降低了成本,以便于更好的应用于临床检测。

2  材料和试剂

   （1）Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)

    组份浓度  100 mg/ml Ampicillin

    配制量    50 ml

    配制方法  称5 g Ampicillin置于50 ml离心管中，然后添加40 ml灭菌水，混合溶解完毕后，定容至50 ml；用0。22 µm过滤膜过滤除去菌；小份按照1ml每份分装后，放入-20℃的环境进行保存。

    （2）IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

     组份浓度  24 mg/mL IPTG

     配制量    50 mL