复筛：将初筛得到的菌株按以上方法培养并制备菌悬液，取1mL接种到100mL反硝化培养基中，30℃、160r/min摇床培养24h。移取20mL培养液于8000r/min离心5min，测定上清液中的NO3--N的含量，与未接种的培养基作对照。选取一株反硝化作用最强的菌株进行脱氮特性研究。

1。5 菌株脱氮特性研究

1。5。1 碳源对脱氮效果的影响文献综述

将脱氮特性培养基的碳源分别设置为乙酸钠、丁二酸钠、葡萄糖、柠檬酸三钠（改变碳源含量维持C/N为11），其余成分均相同。取菌悬液1mL，分别接种到100mL不同碳源的脱氮特性培养基中，培养24h后检测培养液的NO3--N、NO2--N含量以及OD600。每组实验做三个平行样。

1。5。2 C/N对脱氮效果的影响

根据上述结果选取最佳碳源，通过改变基础培养基中柠檬酸三钠的量，设置C/N分别为9、11、13、15、17，将菌株分别接入，温度为30℃、转速为160r/min摇床培养，培养24h后检测培养液的NO3--N、NO2--N含量以及OD600。每组实验做三个平行样。

1。5。3 pH对脱氮效果的影响

在上述最佳碳源、C/N条件下，用HCl和NaOH溶液将基础培养基pH分别调为5。0、6。0、7。0、8。0、9。0,接入菌株，30℃、转速为160r/min摇床培养，培养24h后检测培养液的NO3--N、NO2--N含量以及OD600。每组实验做三个平行样。

1。5。4 温度对脱氮效果的影响

在上述最佳碳源、C/N和pH条件下，设置温度梯度为25℃、30℃、35℃、40℃，接菌培养，摇床转速为160r/min，培养24h后检测培养液的NO3--N、NO2--N含量以及OD600。每组实验做三个平行样。