3。4  酶学性质研究 11

3。4。1  不同pH对酶活的影响 11

3。4。2  不同温度对酶活的影响 11

3。4。3  不同金属离子对酶活的影响 12

3。5  讨论 13

结 论 14

致  谢 16

1  前言

淀粉是植物当中最多的多糖类物质，常作为工业中生产糖浆的廉价原料。淀粉是一种葡萄糖聚合物，在植物体内担负储存能量的作用，包括直链淀粉和支链淀粉[1]。自古以来，淀粉是为人类提供能量的主要物质。当今世界，工业化国家都可以从一些谷物（如马铃薯、玉米、木薯）当中提取出大量纯淀粉。淀粉作为一种重要商品，在工业上得到了广泛的应用。最重要的应用是，在许多地方，淀粉被发酵生成乙醇，再加上淀粉是一种可再生资源，所以非常适合在工业上用来生产燃料酒精[2]。

我国是乙醇第一来自优I尔Y论S文C网WWw。YoueRw。com 加QQ7520~18766 大生产国，又加上乙醇在工业上得到广泛使用，使用乙醇代替汽油已有很长一段时间[3]。目前，用淀粉发酵生产燃料乙醇的发展进程越来越受到人们的关注。然而，制约乙醇产业发展的主要问题是成本较高和耗能太大，所以，这两方面是目前科学家研究的重点[4]。生淀粉酶(Raw Starch Glucoamylase)是指能够水解不经过蒸煮糊化的生淀粉颗粒的一类酶[5]。利用生淀粉糖化酶进行生料乙醇的发酵可以用一步糖化代替传统工艺中的糊化、液化和糖化，省去了蒸煮糊化工艺，而这一步所耗损的能量大约占全部生产所需能耗的25%-40%，砍去这一步将大大减少能耗，将大大降低生产成本，增强竞争力[6]。

马铃薯淀粉作为生产生物乙醇的主要原料，发展空间巨大。我国历来特别注重马铃薯在农业上的生产，种植面积超过9000万亩，年产10000万吨。但这样仍无法改变我国在马铃薯加工业的劣势，严重制约了整个工业的发展，用马铃薯来生产乙醇成为我国马铃薯工业应用的一种新的选择[7]。而目前国内外对马铃薯生淀粉糖化酶的研究还存在一些关键问题未解决，使得马铃薯生淀粉糖化酶的工业应用还受到一定的限制。因此对于新型的功能良好的马铃薯生淀粉糖化酶的研究探索迫在眉睫[8]。

本研究以马铃薯淀粉为原料，将从自然界筛选高产酶的优良菌株，并将其作为发酵菌种，对霉菌的发酵条件进行初步的优化，对马铃薯生淀粉糖化酶的酶学性质进行初步探索，旨在解决马铃薯生料发酵耗能过高的问题。

2  材料与方法

2。1  材料

2。1。1  菌种

霉菌（M55）由本实验室自筛获得。

2。1。2  培养基

（1）种子斜面：马铃薯20%，葡萄糖2%，琼脂2%,自然pH。

    （2）选择性培养基：生马铃薯淀粉20g、蛋白胨2g、NaNO3 3g、KH2PO4 1g、MgSO4·7H2O 0。5g，去离子水定容1000mL，自然pH，121℃灭菌20min。生马铃薯淀粉在110℃下干热灭菌4h后加入。

（3）发酵培养基：马铃薯淀粉10g、蛋白胨2g、NaCl 1g、(NH4)SO4 2g、 K2HPO4 1g、MgSO4·7H2O 0。5g，FeSO4·7H2O 0。01g、CaCl2 0。1g。称取上述成分置于烧杯中，加入合适比例的纯水后保持自然状态下的pH，在121℃灭菌20min后备用。利用移液枪将霉菌孢子悬液接种至发酵培养基中，30℃150r/min条件下摇床培养5天。

2。2  方法