摘  要：成熟油菜种子中，因大量油脂、蛋白、酚类物质的存在及RNA易降解的特点导致 RNA 提取困难。为了从油菜种子中抽提出高质量的RNA，本研究通过将天根DP437-02试剂盒与康为世纪CW2598M试剂盒相结合，使用β-巯基乙醇抑制RNA酶活性防止酚类物质氧化，DNA酶去除DNA，并采用吸附柱去除多糖类物质等措施，对油菜种子RNA的提取方法进行有效改进。结果表明：28SRNA、18SRNA条带清晰完整，无明显降解，采用该方法能提取出质量高且完整性好的RNA，可用于后续的分子生物学研究。92665

毕业论文关键词：油菜，成熟种子，RNA提取

Abstract：The seeds of oil crops, because there are a lot of fat, protein, characteristics of the presence of phenolic substances and easy degradation of RNA due to the extraction difficult。 In order to extract high quality RNA from rapeseed, the study by Tiangen DP437-02 kit and CW2598M kit for Kang century combined use of beta mercaptoethanol inhibition the activity of RNA to prevent the oxidation of phenolic compounds, DNA enzyme DNA removal, and the removal of polysaccharides and other measures of adsorption column, the extraction method of rape seed RNA is effectively improved。 The results showed that the 28SRNA and 18SRNA bands are clear and complete, There was no obvious degradation, and RNA could be extracted with high quality and good integrity, which could be used for subsequent molecular biology research。来自优O尔P论R文T网WWw.YoueRw.com 加QQ7520`18766

Keywords：Rape, mature seed, RNA extraction

目  录

1 前言 4

2 材料与方法 4

2。1 实验材料 4

2。2 实验用品 4

2。3 实验试剂 4

2。4 油菜种子总RNA提取方法 5

2。4。1 试剂盒提取RNA法 5

2。4。2 基于两种试剂盒改良法 5

2。5 总RNA纯度及完整性检测 6

3 结果与分析 6

3。1 总RNA浓度及纯度测定结果 6

3。2 琼脂糖凝胶电泳结果 6

结  论 8

参 考 文 献 9

致  谢 10

1 前言论文网

分子生物学研究是科学研究中很普遍的一种手段。其中 RNA提取技术不仅是分子生物学的重要组成部分，也是功能基因组学的研究基础[1]，提取高纯度、高完整度的植物组织RNA是进行基因克隆、RNA序列分析、印迹杂交以及构建cDNA文库等研究的必要前提[2,3]。分子生物学研究后续工作的进展及成效在很大程度上取决于 RNA 的质量[3]。因此, 如何提高 RNA 纯度和浓度是当前研究人员十分关注的问题。

     油菜种子属脂肪质种子,含有大量的脂质、蛋白质、多糖、矿物质、维生素、色素、植物固醇、酶类及多酚和植酸等。由于酚类化合物的存在,RNA 提取过程中极易产生褐化效应[4]。氧化的酚类化合物(如醌类)可以与RNA不可逆地结合,导致RNA的降解及RNA活性的丧失[5], 或形成不溶性复合物[6]。多糖能与RNA共沉淀形成难溶的胶状物[7],导致 RNA 不能有效分离，还可以抑制许多酶的活性[8]。

目前已经报道的RNA提取方法主要包括Trizol法[9]、皂土法[10]、LiCl-尿素法[11]、改进SDS法[12]及CTAB法[13]等，这些方法都具有一定的局限性，对于提取那些次级代谢产物丰富、蛋白和油脂含量高的材料的RNA存在着以下几个问题：产率不高、纯度不达标、样品褐化提取不成功等现象[9]。本方法根据目前提取油菜RNA常会遇见的问题，在常用的商业化 RNA 提取试剂盒的基础上进行了探索改进，提出一种可以有效提取高质量RNA的方法。