4。3。1  最适碳源的确定 8

4。3。2  最适氮源的确定 9

4。3。3  最适起始 pH 的确定 10

4。3。4  最适接种量的确定 10

结  论 11

参考文献 12

致谢 13

1  前言 来自优I尔Q论T文D网WWw.YoueRw.com 加QQ7520~18766

蛋白酶是催化分解蛋白质肽键的一群酶的总称，它作用于蛋白质，将其分解为蛋白胨，多肽及游离氨基酸。作为重要的商业用酶之一，蛋白酶约占工业用酶市场的60%[1]。碱性蛋白酶是指在碱性的条件下具有活性，能够水解蛋白质肽键的酶类。碱性蛋白酶商业制剂的销售占整个蛋白酶市场的1/3以上。它可用于洗涤剂、制革、银回收、医药、食品加工、饲料、化学工业、废物处理等方面，尤其是在洗涤剂方面得到广泛的应用[2,3]。目前我国研究开发的碱性蛋白酶酶品种单一，大多数来源于芽孢杆菌属，如地衣芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌等。还不能满足制革、丝绸、日化工业对多品种生产，特别是洗涤工业对特殊性能蛋白酶的需求，迫切需要新型的碱性蛋白酶[4]。

碱性蛋白酶生产菌的生长和产酶条件受到多种因素的影响，直接关系到碱性蛋白酶生产菌的生长速度和产酶量。本实验主要是对碱性蛋白酶产生菌ZD-5的生长条件和产酶条件进行优化研究。分别从碳源、氮源、碳氮比、NaCl、培养基的初始pH五方面研究ZD-5的生长条件，并从碳源、氮源、起始 pH 、接种量、碳氮比几方面对其产酶条件进行研究和优化。

2  实验材料

2。1 菌株

碱性蛋白酶产生菌ZD-5 (本实验室保存)。 

2。2  培养基论文网

种子培养基（1000ml）：葡萄糖10g，蛋白胨2g，酵母浸出粉2g，NaCl 3g，pH9。0。

基础发酵培养基（1000ml）：牛肉膏20g， 蛋白胨5g， 氯化钠5g， KH2PO4 1g, MgSO47H2O 2g，pH9。0。

3  实验方法

3。1比生长率的测定方法

从培养物置于摇床起，每隔两个小时取样，然后将所取样品于600nm处测定OD600值，当OD600值大于0。8时，进行稀释，最后将所得数据输入计算机，用TBLCURVE软件制作生长曲线图。 

用生长曲线图计算比生长率时，采用半对数作图法，即将指数生长期的OD600值及时间输入计算机，用TBLCURVE软件的半对数作图功能，以OD600值的半对数对时间作图，选择函数：Y=AEXP（rx）处理得一直线，该直线的斜率为比生长率。

3。2  菌株生长特性的研究

3。2。1   碳源对菌株生长的影响

将菌株ZD-5的培养液接种到以葡萄糖、玉米粉、淀粉、麦芽糖、蔗糖为碳源的种子培养基中，于37℃下培养，接种量为10%。根据前述方法测定生长曲线，计算比生长率。

3。2。2  氮源对菌株生长的影响

将菌株ZD-5的培养液分别接种到以蛋白胨、酵母粉、蛋白胨+酵母粉(NH4)2SO4+酵母粉为氮源的种子培养基中，于37℃下培养。接种量为10%。同样根据前述方法测定生长曲线，计算比生长率。

3。2。3  碳氮比对菌株生长的影响

将菌株ZD-5的培养液分别接种到以葡萄糖为碳源，蛋白胨+酵母粉为氮源，碳氮比分别为1。5:1、2:1、2。5:1、3:1、3。5:1的种子培养基中，于37℃下培养。接种量为10%。根据前述方法测定生长曲线，计算比生长率。