摘要：作为生产纤维素酶的高产菌株里氏木霉，其生产的纤维素酶是种复合酶系，包括外切葡聚糖酶、内切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶。里氏木霉的β-葡萄糖苷酶在其纤维素酶的整体酶活及其表达中起到了双重的作用，编码β-葡萄糖苷酶的基因有11个。本实验的目标是通过利用农杆菌介导转化的方法，将编码β-葡萄糖苷酶的基因cel3d转入到里氏木霉RutC-30中，并运用分子生物学PCR方法鉴定其转化结果。为研究过量表达β-葡萄糖苷酶对里氏木霉所产的纤维素酶的整体酶活的影响，从而为构建生产纤维素酶的高产菌株以降低工业生产生物燃料乙醇所需纤维素酶制剂的成本提供理论基础。94080

毕业论文关键词：里氏木霉，β-葡萄糖苷酶，农杆菌介导转化法

Abstract:As a high-yield strain of cellulase, Trichoderma reesei produces cellulase which is a complex enzyme system, including endo glucan, endo glucosidase, and β-glucosidase。 β-glucosidase of T。reesei played a dual role in the overall enzyme activity and its expression in cellulase, and there were 11 genes encoding β-glucosidase。 The aim of this experiment was to transfer the gene encoding cel3d encoding β-glucosidase into T。reesei RutC-30 by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation, and to identify the transformation results by molecular biology PCR。 Effect of overall research of excess expression of cellulase enzyme glucosidase produced by T。reesei in the cell, so as to construct high yield strains cellulase production in order to reduce the production of bio fuel ethanol industry to provide a theoretical basis for the cost of cellulase preparation。

 Key words: Trichoderma reesei, β-glucosidase, Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation

目录

1 前言 3

1。1 研究意义 3

1。1。1 资源利用问题 3

1。1。2 生态环境问题 3

1。2 文献综述 4

1。2。1 纤维素 4

1。2。2 纤维素酶 4

1。2。3 丝状真菌里氏木霉 4

1。2。4 农杆菌介导转化方法 5

1。3 研究目的 5

1。3。1为解决资源、环境及经济问题做贡献 5

1。3。2提供理论研究基础 6

2 主要研究内容及方法 6

2。1 实验材料 6

2。2 主要实验仪器 6

2。3 主要培养基 6

2。4 实验技术路线 7

2。5转化实验过程 8

2。5。1 农杆菌感受态细胞的准备 8

2。5。2 里氏木霉孢子的准备 9

2。5。4 里氏木霉和农杆菌的共培养以及转化子的筛选 10

3 研究结果及其分析 10

结论 12

参考文献 15

致谢 15

1 前言

1。1 研究意义论文网

在秸秆造成环境污染和秸秆资源较低水平利用的社会背景之下，加之我国能源的储量问题日益突出、传统化石能源的消耗造成严重的环境危害，因而利用生物质(秸秆)纤维为原料来生产生物燃料乙醇成为一项较为迫切的、具有重要战略意义的任务，有利于经济的可持续发展，并对社会和生态环境也具有极其深远的意义[1, 2]。