过量表达RdreB1BI基因对草莓花期耐寒性和品质的影响(2)
因此，提高草莓植株的抗寒性有很大意义。但草莓是八倍体，传统的育种方式效率不高，转基因技术提供了一种更高效的解决方式。目前已经从植物中鉴定了数十种与提高抗逆性相关的功能基因，依据编码产物的功能，这些基因可以分为两大类：一类是直接编码保护细胞免受逆境伤害的功能物质的基因，如编码抗冻蛋白、水通道蛋白、脯氨酸等调节物质的基因；二是逆境下与信号转导和和转录调控有关的基因，如MAP激酶、CDP激酶、bZIP、MBY/MBC以及DREB类转录因子[5]。转录因子RdreB1BI最初在水稻中发现，是与植物抗逆性相关的转录因子。已有研究表明将RdreB1BI基因转入拟南芥后，拟南芥的抗旱性和抗寒性得到很大提高[6]。研究发现转录因子DREB基因是低温胁迫应答的重要成分，经低温诱导后，可与具有相应应答原件的启动子序列结合，提高转基因植物中与非生物胁迫相关的大量靶基因的表达量，从而提高植物对干旱、低温、高盐等多种逆境的抵抗能力[7-8]。
提高草莓的抗寒性在生产上可以有效节约成本和增加产量，而草莓最重要的经济价值在于其果实，因其可口的风特性和其独特的营养生理学功能而被称为“水果皇后”，是世界七大水果之一[9]。在抗寒性提高的基础上，仍需要筛选出具有高品质果实的株系。
所以，研究转RdreB1BI基因“红颊”草莓的花期抗寒性以及成熟期果实品质对于其实际生产应用，具有很高的实用价值及意义。
1 材料与方法
1.1 材料
材料为已通过转基因分子检测的“红颊”草莓品种的不同株系：株系1、株系7、株系8、株系9、株系10及CK。挑选生长健壮、长势一致且处于花期的各株系3株（设置3个重复），共18株。待果实成熟期，挑选生长健壮，生长一致的各株系3株（设置3个重复），共18株。
1.2 仪器与设备
光照培养箱，分光光度计，天平，离心机，手持式折光仪。
1.3 方法
1.3.1 温度的设置及材料的准备
根据南京地区草莓的花期，参考2、3月份南京地区的最低温度，设置0℃、－2℃、－4℃、－6℃的零下低温处理，包括正常室温在内共设5个温度处理，每温度处理设3个重复，共18株。对选取的植株统一进行常规管理一段时间。
1.3.2 生理指标的测定
对6个草莓株系测定其在0℃、－2℃、－4℃、－6℃及正常室温下的MDA、可溶性糖及可溶性蛋白的含量和SOD、CAT的活性，分析各株系在低温胁迫下的表现。
在果实成熟期，分别对6个株系的草莓果实测定其大小和质量，总酚、类黄酮、花青苷、可溶性糖和可溶性固形物的含量，分析各株系果实品质。
1.3.2.1 MDA及可溶性糖含量的测定
测定方法采用TCA法[10]，具体方法如下：
5%三氯乙酸(TCA)溶液的配制：用电子天平称5g三氯乙酸，蒸馏水定容到100ml的容量瓶中。
0.67%硫代巴比妥酸(TBA)溶液的配制：用电子天平称取称5g TBA，加少量的1mol/L氢氧化钠溶解，然后用蒸馏水定容到100ml，现配先用，避光保存。
取0.5g植物样品，首先加入2ml5%TCA研磨成匀浆，然后将匀浆在8000g离心力下离心l0min；取上清液2ml，加入2ml0.67%TBA溶液混匀后沸水浴30min，迅速冷却后在3000r/min下离心15min；取上清液分别测定OD600、OD532、OD450，以2ml5%TCA+2ml0.67%TBA为对照。每个样品设3个重复。
计算：
MDA浓度C(μmol/L)=6.45(OD532－OD600)－0.56OD450
MDA含量(μmol/g)=C×V•g-1
可溶性糖浓度(mmol/L)=11.71OD450
可溶性糖含量(mmol/g)=11.71OD450×V•g-1
V：提取液体积
g：植物组织鲜重
1.3.2.2 SOD活性的测定
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