1.2外植体对月季组培的影响
 外植体的大小以及取材部位、时间等直接影响月季组培的效果,选择合适的外植体是月季组培成功的重要保证。
 外植体很小时,有利于培养脱毒的植株。对月季的杉树坏疽环斑病毒( Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)可通过茎尖培养的方式达到脱毒的目的,如果单纯为了快速繁殖,可用大的茎尖或茎段进行离体培养,这时外植体的大小决定了茎尖的成活比例。一般说外植体愈大,成活率愈高,成苗时间愈短。茎尖在1 ~ 10mm长短时,对形成多芽苗最有效,不但多芽苗所占百分率高,而且每个茎段的侧枝数也比较多。外植体的大小同时影响外植体自身的发育和月季组培苗茎的增殖,外植体的长度在9.0 ~ 10.0mm,直径在3.0 ~ 3.5mm 范围时,茎的增殖和发育是最好的。但Horn对某几种月季进行微繁实验时发现外植体的大小对茎的增殖、叶片数目没有影响,其他一些研究者对只有一个茎节的“Sweet Promise”进行组织培养中得到了类似的结论。
外植体的取材部位对芽的萌发也有影响。很多研究都证明枝条中部的腋芽萌发较顶部和基部时间早,且中部的腋芽长势好,增殖系数高,其次是基部,再次是顶部。
外植体的灭菌方法也会直接影响月季组织培养的效果。外植体灭菌方法很多,使用药剂不一,但其目的是要得到无菌、正常的活体材料,因此应根据材料的不同来决定灭菌程序和处理时间。
1.3不同继代培养基对增殖系数的影响
  继代增殖培养受糖浓度、pH 值、激素配比的影响。糖量加大、pH 值降低会使月季继代苗分化率提高20%, 同时可缩短继代周期,但糖浓度不可超过50 g/L,pH 值不可低于5.5。适宜的激素种类和浓度配比是月季腋芽萌发和丛生芽增殖的关键。继代培养中常使用的激素有6-BA、NAA、IBA、GA3,少数采用TDZ、KT、ZT、IAA、ETH。6-BA的有效浓度为0.1~3.0 mg/L,NAA 的有效浓度为0.005~0.5mg/L、也有用到1.0~2.0 mg/L[31],IBA 的有效浓度为0.01~0.3mg/L。低浓度的6-BA 有利于不定芽的增殖,浓度过高则抑制不定芽增殖;合适浓度的NAA 有利于芽和叶生长,但浓度过高诱导产生大量愈伤组织, 不利于侧芽的直接分化和生长。乙烯也能提高月季芽的增殖率,其效果与浓度有关,以5 mg/L 最佳,但乙烯不利于苗的长高[32]。除受激素的影响外,继代培养还受环境因子的影响。莫磊兴等[28]研究了光照强度对嫩茎增殖的影响, 发现在月季继代培养过程中,光照强度与嫩芽的玻璃化程度有密切关系,光照强度越低,玻璃化程度越重,在光照强度相近的自然散射光和日光灯照射下, 自然散射光的玻璃化率也明显低于日光灯。月季继代培养较适宜的光照是自然散射光3000lx 左右。此外,培养瓶里的含水量、相对含水量、水汽压都会影响月季芽的增殖。继代时间的长短也会对增殖有影响,Chu 等[33]报道将继代时间从3 周延长至6 周,微型月季的增殖率显著提高。还有研究采用摘心等其他方法来提高增殖的。高彩云等[34]在继代培养的接种操作时,切去嫩芽的顶芽后,再转接到新的培养基上,对嫩芽增殖有很大的促进作用。
1.4生根培养基的选择
多数试验采用的生根培养基为1/2MS。Skirvin 等[35]在用Forever yours 月季做生根试验时发现,采用1/4MS 培养基,不添加生长素即可促进生根。Davies[22]在无激素的培养基中添加4%蔗糖,使几个品种的月季全部生根。Hyndman等[36]研究发现,MS 培养基中盐浓度过高,特别是氮素含量过高会导致生根不适应,因此需减少无机盐用量。生根使用的激素主要为IBA、NAA、IAA 等生长素,其中IBA 有效浓度为0.01~1.0 mg/L、NAA 有效浓度为0.01~1.0 mg/L、IAA 使用较少;也有研究采用ABT 的。任文英等[24]采用的丰花月季试管苗生根技术ABT 速蘸法,生根快、整齐,同时在不含激素的培养基中有利新生根的生长发育, 生根阶段试管苗苗高及木质化程度明显提高, 该方法优于普遍采用的将生长素加入培养茎中进行诱导的生根技术。李正平[37]在月季组织培养中使用ABT 生根粉,促进生根浓度为0.5~10.0 mg/L,最佳浓度为0.5~2.0 mg/L。
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