机械化秸秆还田对稻田土壤微生物功能多样性的影响(3)
1 材料与方法
1.1实验材料：
本研究于2016年，在江苏境内选取三个实验地点，分别是苏北的泗阳、苏中的金坛、苏南的如皋，设置双因子裂区试验。主区为耕作方式，包括两个水平：旋耕 (RT) 和翻耕 (PT)；裂区为秸秆还田方式，包括两个水平：秸秆全量还田与秸秆移除。其中如皋地区仅采用旋耕耕作的单因子秸秆还田耕作方式即如皋RNRT-如皋RRT，其他两个地区均采用双因子裂区试验：金坛JNRT-金坛JRT、金坛JNPT-金坛T、泗阳SNRT-SRT、泗阳SNPT-SPT（每个处理共有三个重复）。各地区各处理田区的植株施肥量、中耕除草、水量管理、培土等田间管理措施均保持一致。
1.2实验方法：
1.2.1 土壤样品的采集：
在水稻收获之前，于2016年11月3、4、5日，前往如皋、金坛、泗阳的田间实验地点采用五点取样法，在每个小区的15cm深处土采集土壤样品，采集完装入密封袋（共计30个样），然后立即运回实验室。再弃去土样中的杂根，用20目的筛板均匀筛土之后放于4℃恒温冰箱保存，留置后期室内实验处理分析。
1.2.2 土样接种实验处理：
首先将Biolog Ecoplate 从4℃冰箱内取出，然后预热至25 ℃留存。其次，称取5g新鲜土样加入到已装有45mL灭菌生理盐水并放入盛有玻璃珠(0.85%)的150 mL三角瓶中, 在摇床上振荡30min（摇床设置：28℃-250r/min），静置片刻，浸提土壤菌悬液用无菌生理盐水稀释至10-3倍（三角瓶中为10-1，再取1ml10-1加入到盛有9ml无菌生理盐水的试管中摇匀即得10-2，1ml10-2加入到盛有9ml无菌生理盐水的土样槽中摇匀即得10-3），吸取125μL的10-3稀释液至Biolog ECO板的微孔中，后将接种好的板放置在25 ℃的恒温培养箱中避光培养168h（7天），每隔24 h在Biolog测试读数仪上读取590 nm波长的吸光度（共计读数8次）。
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