产多糖耐镉芽孢杆菌的筛选及其胞外聚合物的组成(4)

挑选低温保存的菌株于5 mL LB液体培养基试管中，摇床活化18 h。配置LB液体培养基，添加CdCl2母液，使Cd2+浓度梯度为50、80、100、120 mg/L（以纯Cd2+计），另以不含任何重金属离子的LB液体培养基作对照，将活化后的菌液按1%的接种量分别接种于上述培养基中，置于摇床(160 r/min)上恒温(30℃)摇瓶培养。稳定期时收集菌悬液，10000 r/min，4℃，离心15 min，上清液经0.22μm滤膜过滤，最终滤液加入三倍体积的冰乙醇沉淀后4℃保存24 h。产生的沉淀离心分离，用70%-100%乙醇水混合物洗涤，收集到的沉淀物即为EPS粗提物。将得到的EPS粗提物用少量去离子水溶解,加入透析袋中，4℃透析24 h，去除蒸馏水，即为可溶性EPS纯品。将可溶性EPS冻干，室温保存。EPS产量记录干重，以未加入镉的EPS做对照。