蚂蟥冬眠期间抗氧化酶活性及抗氧化酶相关基因表达的研究(2)
目前市场对蚂蟥的需求量越来越大，但是受到环境污染、人类捕杀过度的影响，野生蚂蟥资源已经无法满足日益增长的市场需求。因此，人工养殖蚂蟥不仅是一个良好更是必须的解决方法。但是在蚂蟥的大规模养殖中一般没有有效的温度控制系统，而蚂蟥对温度的变化很敏感[13]，所以越冬过程中可能会造成蚂蟥大规模死亡。为了避免这种情况发生所造成巨大损失，除了人力、物力成本较高的改造养殖条件增加温度控制系统方式外，还可以通过改良蚂蟥种质以达到减少越冬过程中死亡率的目的。查阅相关资料，蚂蟥在温度低于5℃时进入冬眠状态，但未见研究蚂蟥冬眠过程中抗氧化酶基因表达量的相关文献。本课题拟通过研究蚂蟥在冬眠期间抗氧相关酶类基因表达量变化和酶活性变化趋势，探究蚂蟥冬眠过程中抗氧化调节的机制，对蚂蟥种质改良有指导意义。
1 材料与方法
1．1 实验材料
Alpha-1506紫外可见分光光度计（上海谱光仪器有限公司）、电子天平（山海精密仪器厂）；实时荧光定量PCR仪（美国ABI Step one7500）；PCR仪（PTC-200，bio-RAD），电泳仪（DYY-6C，北京优尔一仪器厂）；凝胶成像仪（JS-380，上海培清科技有限公司）等。
四水合钼酸铵（分析纯）、浓盐酸（36%）、叠氮化钠（分析纯）、邻苯三酚（分析纯）、EDTA（分析纯）、pH为7.4的磷酸缓冲溶液、无菌水、SYBR® Premix Ex Taq™ (Tli RNaseH Plus)(来自：上海皓嘉科技发展有限公司)（荧光定量）；Prime Script .RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time) (来自：上海皓嘉科技发展有限公司)（反转录）等。
实验用蚂蟥由南京农业大学中药材研究所提供，经郭巧生教授鉴定为蚂蟥Whitmania pigra Whitman。
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