鱼源维隆气单胞菌的分离与药敏试验(2)
文隆气单胞菌由Hickman-Brcnncr等首先分离出来并且根据法国生物学家Vcron的姓氏给它命名（Vcron在气单胞菌和弧菌的研究上有突出贡献）。现如今越来越多的病例表明文隆气单胞菌已经成为一种重要的人-鱼共患的致病菌，对其进行深入的研究在水产养殖产业、食品卫生以及人类身体健康方面都是至关重要的[11]。文隆气单胞菌虽然可以被大多数的抗生素杀死，但是使用抗生素治疗会导致很多不良现象，所以面前对文隆气单胞菌所引起的疾病最有效的方法是疫苗免疫预防[12-13]。
鲫鱼（Carassius auratus）是辐鳍鱼纲鲤形目鲤科鲫属的其中一种鱼类，在中国也是食用最广的一种鱼类，所以在水产养殖方面鲫鱼也占了其中重要的比例。而鱼类流行疾病会对鲫鱼的养殖造成巨大的影响，会直接带来巨大的经济损失，所以对鲫鱼致病菌的研究有着重大的意义。
本实验是对实验室饲养条件下自然发病的鲫鱼进行解剖，无菌操作取其心脏接种于LB固体培养基，通过菌种纯化、革兰氏染色、生理生化试验、16S rRNA测序等系列实验鉴定该鲫鱼心源细菌为文隆气单胞菌，并针对该文隆气单胞菌对各抗生素的敏感性进行药敏试验，为进一步了解鱼源文隆气单胞菌并对它的有效防治及控制提供一定技术支持。
1 材料与方法
1.1供试材料和试验试剂
1.1.1 供试材料
健康鲫鱼，购自徐州某市场，实验室条件下正常饲养；
患病鲫鱼，实验室条件下正常饲养，自然发病。
1.1.2 实验试剂
草酸铵结晶，碘液，酒精，番红染液，酵母粉，胰蛋白胨，NaCI，琼脂粉
药敏纸片，生化管，琼脂糖(Agarose)、丙烯酰胺(Acr) 、亚甲基双丙烯酰胺( Bis)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、N, N, Nc,Nc-四甲基乙二胺(TEMED)，硼 酸(borio acid)、乙二胺四乙酸二钠盐( EDTANa2)、氢氧化钠( NaOH)、过硫酸铵(AP)，EB染液。
1.1.3仪器
显微镜，PCR扩增仪，电泳仪，移液枪，接种环，培养箱，冰柜，无菌操作台，白瓷盘，剪刀，镊子等。
1.2实验方法
1.2.1菌种的分离与纯化
无菌操作室，白瓷盘，剪刀，镊子等用具均是灭过菌的。将濒死患病鲫鱼放在装有纱布的白瓷盘中，用剪刀由肛门向头部剪开鱼的腹部，注意不要弄破内脏，将整个上腹部直接剪掉，靠近头部的地方，很容易看见仍跳动的心脏，镊子夹住心脏接种在LB固体培养基上，然后使用接种环四区划线法分离细菌。将接种了菌的培养皿标记为X2，30 ℃恒温培养15 h。次日挑取平板上的单菌落，接种在新的培养基上，如此传代培养约四代，直到培养基上的菌落形态基本一致，得到纯化的菌株。