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分光光度法鱼体中重金属含量的分析研究(5)
1.2.6 高效液相色谱法
高效液相色谱法(HPLC)据我所学是一种分辨率和灵敏度高应用范围广的一种分析方法。它是痕量的金属离子和有机试剂反应形成有特定颜色的络合物,分离用的是HPLC而检测用的是紫外可见检测[7]。它的优点还有定量精度高并且重复性好,同原子吸收法和电感耦合等离子体发射光谱一样可以同时测定多种元素。缺点则是费用高,需要用到各种填料柱,填料柱的容量比较小,分析生物大分子和无机离子比较困难。除此之外,流动相消耗大而且大多数会有毒性,可以检测的重金属种类比较少。这是因为络合试剂选择有限,绝大多是使用的还是卟啉类试剂,它能和多种元素生成稳定的络合物。吴献花等采用快速分离柱高效液相色谱法测定食品中重金属的含量,结果表明Ni、Cu、Sn、Pb、Cd和Hg的检测限分别为3、4、4、3、2、2ng/L,且该方法的相对标准偏差为2.3%~2.8%,回收率为95%~105%[8]。
1.2.7 酶分析法
酶分析法是用来对食品中痕量有害物质和环境介质的测定,它的优点是检测速度快、特异性强、操作和设备都很简单的检测有害物质的方法。缺点则是可检测的重金属种类较少。
1.2.8 酶联免疫检测法
酶联免疫检测法(ELISA)的就是抗体通过和酶复合物结合,然后显色就可以检测了。它的优点有检测速度比较快、费用不贵、简单易携带,具有高度的灵敏度、特异性和选择性。缺点则是容易出现假阳性
1.2.9 生物传感法
生物传感法是拥有独特生物识别功能的便宜快捷的检测方法,它由四部分组合起来的一套分析设备,包括生物识别原件、信号转换装置、显示系统和数据处理系统。这项设备可以按照一定规律将它换成可识别的信号。用此方法结果精确、可重复使用,除此之外它还有选择性高、抗干扰能力强、体积小却响应快等优点点。缺点则是制作工艺困难、识别元件有限,不易储存。
1.3 分光光度法的原理
分光光度法的测量理论依据是在特定波长处或一定波长范围内通过测定被测物质内光的吸光度或发光强度,然后对被测物质采取定性和定量分析的方法[9]。
在分光光度计中,把样品溶液用不同波长的光连续照射,可以得到各种大小波长所对应的吸收强度,然后以波长(λ)设为横坐标,吸收强度(A)为纵坐标得到吸收光谱曲线A-λ的线性关系。吸收光谱法也称分光光度法就是用吸收光谱曲线进行定性、定量;紫外分光光度法则是用紫外光源测定无色物质的方法;同理可得可见光光度法是可见光光源测定有色物质的方法。分光光度法的应用光区包含了三个区域,分别为紫外光区(200~400nm),可见光区(400~760nm)和红外光区(2.5~25μm)。
这三种方法的测量理论依据是朗伯比尔定律,即一束单色光通过一定浓度范围的有色溶液,溶液对光的吸收程度A与溶液浓度c(克每毫升)或液层厚度b(厘米)成正比。它的
数学
表达式为:
A=abc
式中,a为比例系数。当c的单位是摩尔每升时,比例系数用ε,即A=εbc, ε叫做摩尔吸光系数,单位是L/(mol*cm)。它表示的是在一定波长下有色物质的特征常数。
分光光度计的工作原理是不同的物质所在的吸收光带不同,对光的波长的吸收具有选择性,所以色散后的光谱通过某一特定溶液后,中间某些波长的光线会被溶液有不同程度的吸收[10]。但是在一定的波长下,溶液中物质的浓度和光能量减弱的程度成比例关系。透光强度It与入射光强度I0的比值It /I0称为透光率T:
A=-lgT=-lg(It /I0)
测定时,把有色溶液装在厚度为b倒入吸收池中,此时吸光度A只与溶液浓度c成正比。
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