‘阳光玫瑰’葡萄无菌体系的建立及茎尖培养研究(2)
1．1．1 材料选择 7~8月份，选取阳光玫瑰葡萄一年生新嫩枝条，剪取 2~3cm 的单芽茎段作为外植体。
1．1．2 材料处理 先将外植体放入自来水下冲洗 1 min，清洗掉异物；再使用肥皂水进行浸泡清洗 4 min，清除细小异物、杀菌；最后进行 4 h以上的蒸馏水冲洗，保证肥皂水、吸附物、细菌等杂物的充分消除。
1．2 试验方法
1．2．1 外植体消毒时长的筛选 将洗净的外植体在超净工作台上使用 75%酒精浸泡30 s，消除表面气泡，并进行初步杀菌。再使用0. 1% HgCl2试剂对外植体消毒，消毒时间分别为3 min、5 min、10 min、15 min。然后使用无菌水冲洗外植体冲洗 10 s，完全清除 HgCl2试剂的残余液体。最后将消毒完毕的外植体接种在以 MS 主体的培养基上进行启动培养，并附加不同浓度配比的 IBA 与6-BA溶液。培养 10 d 后，统计茎尖存活率(以茎尖是否萌发出小叶片为存活标准)。培养基中均加入 3%蔗糖, 0.6%琼脂, pH 为 5．8～6．0，光照强度为 40 mmol/(m 2 •s)，光周期为16 h/8 h(光/暗)，培养温度为(25±1) ℃。
1．2．2 初代培养基的筛选 初代培养基使用 MS 做为基本培养基，分别添加 6-BA 1.0、1.5、2.0 mg/ L 和 IBA 0.02、0.05 mg/ L，进行激素配比试验,，筛选出适合外植体启动分化的培养基。培养15d后，统计茎尖芽萌发个数。培养基中均加入 3%蔗糖, 0.6%琼脂, pH 为 5．8～6．0，光照强度为 40 mmol/(m 2 •s)，光周期为16 h/8 h(光/暗)，培养温度为(25±1) ℃。
1．2．3 继代培养基的筛选 继代培养基使用 MS 作为基本培养基，添加1. 0 mg/ L 6-BA + 0. 03 mg/ L IBA + GA 0. 2 mg/ L，进行MS、3/4MS、1/2MS 的配比试验，筛选出适合茎尖增殖培养的培养基。培养15d 后，统计茎尖的增殖数量。培养基中均加入 3%蔗糖, 0.6%琼脂, pH 为 5． 8～6． 0，光照强度为 40 mmol/(m 2 •s)，光周期为 16 h/8 h(光/暗)，培养温度为(25±1) ℃。
1．2．4 生根培养基的筛选 生根培养基使用 1/2 MS 作为基本培养基，分别添加 6-BA 1.0、1.5、2.0 mg/ L，进行激素配比试验，筛选出适合茎尖生根培养的培养基。培养20 d后，统计根长。培养基中均加入 3%蔗糖, 0.6%琼脂, pH 为 5．8～6．0，光照强度为 40 mmol/(m 2 •s)，光周期为 16 h/8 h (光/暗)，培养温度为(25±1) ℃。 1．3 数据处理 根据下列方法统计阳光玫瑰茎尖离体培养存活率，启动培养的生长率 ，增殖过程中的增殖率、增殖系数及生根过程中的生根率。利用 SPSS 软件对各组数据进行相关显著性分析，从中得出最优的激素配比，建立起最优茎尖培养体系。 成活率 = (茎尖萌发数量&pide;茎尖接种数量) ×100 % 萌芽率 = (萌发芽数量&pide;接种芽数量) ×100 % 增殖率 = (茎尖增殖数量&pide;茎尖接种数量) ×100 % 增殖系数 = 培养增长节位数&pide;接种时节位数 生根率 = (诱导生根茎段数&pide;接种茎段数) ×100 %