奶牛乳腺ACBD6环形RNA的克隆与验证(2)
近年来，RNA测序（RNA-seq）和有关生物方面的技术和科技发展的很快，许多实验方法可以用在数据分析中使得这些数据更容易被我们所利用。在最近的研究中发现人类成纤文细胞中的circRNA就高达25000多种。虽然近年来我们发现了如此之多的circRNA，这些cicrRNA的作用和在生物方面所发挥的功能对我们来说还是一个未知数，我们不了解他们是怎么在这些方面发挥他们应有的机制的，然而最近的两项研究表明发现一些环形RNA基因表达调控方面发挥着至关重要的作用。环形RNA可以与miRNA结合将miRNA对靶RNA的抑制作用消除，这样一来miRNA靶标的表达水平就被环形RNA所调控。还有，某些环形RNA被发现极有可能是一类非常重要的全新类型的转录后调控因子，这种新型转录后调控因子的功能有：调控其他RNA水平、调节蛋白质活性、作为蛋白质合成的模板。然而，有关环形RNA的功能我们还是知之甚少，这需要我们进行更深入研究才能得以发现，环形RNA在ceRNET中如何发挥作用以及其中的一些细节仍然是我们需要去发现和研究的重要部分。环形RNA在疾病发生发展中起到的一些作用的具体机制也有待我们进行进一步的探索。
本文就奶牛乳腺ACBD6 RNA的克隆与验证通过具体的实验方法进行研究，克隆找出环形RNA的序列然后通过两种不同的方法来验证ACBD6的环形结构以及通过对其二级结构的预测推测它的生物学功能，为以后的研究提供基础和理论依据。本实验以奶牛乳腺作为研究对象和模型，对ACBD6 RNA进行探讨和研究以揭示环形RNA的功能及作用具有重要的生物学意义。
1 材料与方法
1.1试验样品
1.1.1试验样品的采集
去养殖场采集奶牛的乳腺用生理盐水清洗后再用锡箔纸包好后带回实验室保存以备之后使用。
1.1.2实验试剂
PrimeScript RTkit with gDNA Eraser(perfect Real Time)试剂盒（宝生物工程（大连）有限公司）、RNAiso Plus（裂解液）、EDTA、RNase-free水、琼脂糖、溴酚蓝、溴化乙锭(EB)、DL2000 Marker、NaOH、NaCl、焦碳酸二乙酯（DEPC）、氯仿、异戊醇、无水乙醇、Taq酶、染料（SYBR Green）、ddH2O等。