产纤文素酶固体培养基[9] :磷酸氢二钾 0.5 g,硫酸镁4 0.25 g,纤文素粉1.88 g,刚果红0.20 g,琼脂20 g,加蒸馏水至800 mL,调整pH值为7.0后,补充到1000 mL。
1.2 主要仪器与设备
     梅特勒-托利多仪器有限公司生产的型号为PL601-L的电子天平;上海一恒科技有限公司生产的LRH系列的生化培养箱;上海一恒科技有限公司生产型号为SYQ-DSX-280B的不锈钢压力蒸汽灭菌器;北京科伟永兴仪器有限公司生产的101-型电热鼓风干燥箱;苏净集团苏州安泰空气技术有限公司生产的SW-CJ-2FD型洁净工作台;河南新飞电器有限公司生产的BC/BD-426HY冰柜;上海一恒科学仪器有限公司生产的HZQ-X300恒温振荡器。
1.3 主要试验方法
1.3.1 红曲霉菌分离纯化与菌种鉴定
1.3.1.1 红曲霉菌株的分离与纯化
     分离[11]:取5 g红曲米放入装有45 mL无菌水的100 mL三角瓶中,在35℃、150 r/min恒温振荡器震荡15 min进行活化,此浓度为10-1;用移液枪吸取1 mL加入到盛有9 mL的无菌水,震荡摇匀,此为浓度为10-2;依次进行梯度稀释,到10-5。用移液枪吸取10-3、10-4、10-5三个梯度1 mL打入麦芽汁平板培养基中,用涂布涂匀,每个梯度两个平行。30℃培养3~5d。
     纯化:用接种环挑取单菌落,在麦芽汁平板上划线,30℃培养3~5 d。
1.3.1.2 红曲霉菌形态观察与菌种鉴定
     采用载玻片湿室培养法[12]:准备湿室:在培养皿底部铺一张圆形滤纸片,滤纸片上依次放上“U”玻璃片搁架、载玻片、盖玻片(两片),盖上皿盖,外用纸包扎,121℃灭菌20 min。取菌接种:接种环挑取孢子,轻轻在载玻片上碰几下,接种量要少,同一载玻片接种两处。加培养基:用移液枪吸取少量融化冷却45℃豆芽汁培养基滴到接种处,直径约为0.5 cm。④加盖玻片:待培养基凝固前,用无菌镊子将盖玻片盖上,轻轻按压,要求盖玻片与载玻片之间留有小缝隙。⑤到保湿剂:倒入约3 mL20%的无菌甘油,使滤纸完全湿润,盖上皿盖,30℃培养。⑥观察:定时用显微镜观察红曲霉菌生长情况,取16 h、24 h、32 h、48 h、72 h时间点。
1.3.2红曲霉菌的发酵功能研究
1.3.2.1红曲霉菌产酶功能研究
    选择不同的产酶固体培养基培养5 d,采用透明圈法考察红曲霉菌的产淀粉酶、产蛋白酶、产酯化酶、产纤文素酶的产酶功能。
1.3.2.2 红曲霉在麦芽汁培养基发酵功能
 选择麦芽汁液体培养基培养5 d,测定红曲霉菌的产酸、产色素、 产酯化酶和糖化酶活力。
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