农杆菌介导的本生烟瞬时转化的影响因素探索(2)
不同MLA突变体引起细胞坏死情况[2]
在国内有专家以存在于大肠杆菌等一些细菌基因组内的GUS基因作为报告基因转化西瓜枯萎病菌发现了转化子在不同西瓜品种中的侵染差异与品种抗枯萎病的水平呈一定的相关性[5]，以绿色荧光蛋白( green fluorescent protein，GFP)作为报告基因结合瞬时表达技术，能够有效跟踪融合产物在细胞内的运输、亚细胞定位及代谢[6]以及农杆菌介导的桑树瞬时表达体系构建简便、有效、快捷地验证桑树miRNA 对其靶基因的调控作用[7]等等。
瞬时转化的发展大致经历了三个时代，其中第三代是比较优化的表达技术，它具有不需要整合到染色体上，简单、快速、周期短、准确；不受基因的位置效应和基因沉默的影响，表达效率高，转化率高；不产生可遗传的子代，生物安全性高等优点[8] ，为生物药品的开发、疫苗抗体的大规模生产开辟了捷径。植物瞬时转化体系有很多方法，比如基因枪法、农杆菌渗透法、聚乙二醇（PEG）法、电击法以及植物病毒载体介导的方法[9]、浸泡和摩擦接种法[10] ，其中农杆菌介导的瞬时转化的方法在有效分析目的基因表达和功能研究上的应用尤为广泛，它的原理就是在构建好的合适的载体上插入目的基因，然后转化到农杆菌中，通过注射或者是真空渗透的方法使转化过的农杆菌与宿主植物材料有效接触，大部分的T-DNA进入细胞核内进行瞬时表达后即可检测到外源基因的表达，整个过程包括了植物材料的栽培、载体的构建、农杆菌的培养、注射浸润植株以及瞬时表达后的检测。
本实验就改变不同的OD值，以AGL-1、LBA4404、GV3101三种农杆菌分别侵染本生烟，以期优化烟草瞬时转化体系，为目的基因的功能研究搭建平台，有望推动植物－病原菌互作研究中关键基因的鉴定与分析[11]。