Acidovorax facilis 72W细菌腈水解酶基因的克隆(2)
3.2.1腈酸的标准曲线 15
3.2.3产物的验证 18
3.3 发酵实验最佳参数的优化 19
3.3.1诱导剂浓度的选择 19
3.3.2诱导时间的选择 21
3.3.3 培养基成分的优化 22
4 结论 27
致谢 28
参考文献 29
1 绪论
1.1 腈水解酶简介
腈是一类重要的用于合成多种化学品的化合物，它的水解反应可以被广泛应用于氨基酸、酰胺、羧酸及其衍生物等化学品的合成，在化学品合成中占有极其重要的地位。通过一些化学反应腈被轻易地转化成羧酸，但这些反应需要强酸或者碱性和高温条件，同时也产生一些不需要的副产物和大量的无机盐。生物学系统的运用将带有底物的腈转化成羧酸，比较起化学方法来是更好的选择，因为生物方法产量高，反应少，酶具有特异性。大量脂肪族或芳香族的酶催化水解具有高度选择性，因为只有一种腈会水解。由此可见，腈的酶发水解具有很大的潜力。
腈水解酶最早是由Thiman和Mahadevan在1964年的时候从大麦叶中分离出来，能够将吲哚乙腈水解成为吲哚乙酸，故将其命名为吲哚乙腈水解酶。但是在后来的研究中发现，该纯酶对26种不同的腈化合物均具有活性，它水解3-氰基吡啶的活力是吲哚乙腈的8倍。因此Thiman和Mahadevan将其命名为腈水解酶[1]。
1.2产腈水解酶的菌种以及植物
腈酶的发现已经有40多年的历史，第一个能产腈水解酶的微生物菌种是由Hook和Robinson利用天然腈化合物蓖麻碱作为唯一碳源筛选得到的假单孢菌(seudononas)，该菌水解氰基吡啶的能力比蓖麻碱高1.18倍[2] 。起初有人观察到在植物中睛酶可以转化吲哚-3-乙腈生成吲哚-3-乙酸，在此之后, 又有许多研究者利用特定的腈化合物作为唯一碳源或者唯一氮源筛选到一系列能产腈水解酶的细菌、真菌，并在一些植物中也提取出腈水解酶，其中一些具有优良腈酶活力的代表性细菌、真菌和植物见如表1.2中所示，例举了其中一些例子，这些微生物可以代谢很多天然和人工合成的腈类物质。
表1-1 产腈水解酶的微生物菌种和植物
Bacteria
Acidovorax facilis 72W敏捷食酸菌 H ann et al.
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