生物表面活性剂产生菌的分离及鉴定(2)
2材料与方法2.1 实验材料及器皿材料：从污水处理厂排污口处采取研究用土壤 10g，用做生物表面活性剂产生菌的分离及鉴定的实验样品。器皿：EP管、150ml 锥形瓶、100ml 烧杯、平皿、涂布棒，移液枪、保种管、MLS 3780 高压蒸汽灭菌器、DNP-9052型电热恒温培养箱、ZWY2102 恒温培养振荡器、SW-CJ-1F 超净工作台等2.2 试验所用培养基LB 培养基：酵母粉 5g/L、蛋白胨 10g/L、NaCl 10g/L、去离子水1000ml，固体培养基需另加琼脂粉20g/L，121℃灭菌15min。R2A 培养基： 酵母粉 0.5g/L、 胰蛋白胨 0.5g/L、 葡萄糖0.5g/L、 淀粉 0.5g/L、 K2HPO40.3g/L、 MgSO4·7H2O 0.05g/L、 去离子水1000ml， 固体培养基需另加琼脂粉 20g/L，115℃灭菌 30min。发酵培养基：牛肉膏7g/L、葡萄糖 5g/L、NaNO3 2.5g/L、KH2PO4 4g/L、K2HPO44g/L、CaCl2 0.1g/L、NaCl 1g/L、KCl 1g/L、MgSO4 0.2g/L(MgSO4·7H2O0.41g/L)，115℃灭菌 30min。2.3 菌株的筛选与纯化2.3.1 菌株的筛选(1)浇注平板：将灭菌后融化，温度下降至 50℃左右的R2A培养基倒入灭菌的平板中，待其凝固。(2)菌液稀释：称取土壤样品 1g于烧杯中，加入100ml 的生理盐水，用玻璃棒搅拌均匀使其充分溶解后静置5min。 取上清液 100μl， 进行梯度稀释至浓度为10-3、10-4和10-5。稀释方法：取5 个EP管分别编号①至⑤，在各管中分别添加生理盐水 900μl，取土壤样品上清液100μl，加入①号管，用枪头充分混匀。从①号管中取样品溶液100μl 添加到②号管中并充分混匀。依次类推，①-⑤号管中分别对应浓度为10-1-10-5的样品液。
参考文献...9
致谢..11