参考文献 11

致谢 12

引言

Rho激酶调节诸多细胞活动，如对血管平滑肌细胞收缩、肌动蛋白细胞骨架重组的调节，调控多个目标蛋白的功能，因而在细胞生长，增殖和迁移等方面有着重要影响。Y-27632是Rho激酶的特异性抑制剂，是吡啶类衍生物的二盐酸盐，作为Rho激酶信号通路的重要工具，能够选择性地抑制其与其他蛋白发生作用，介导细胞分化过程，便于更好地研究Rho激酶在许多系统中的作用以及它们之间的相互作用，包括血小板的激活、明显创伤的表面愈合、主动脉平滑肌的明显收缩、神经突的退缩、和肿瘤细胞的浸润等[1]。先前研究表明Rho激酶抑制剂Y-27632能够影响细胞骨架重建，激活转录因子，进而调控细胞增殖[2]。

在组织工程等诸多研究中，骨髓间充质干细胞（bone-marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）作为干细胞家族的重要成员，从发育早期的中胚层和外胚层获得，属于多能干细胞，BMSCs最初在骨髓中发现具有多向分化潜能，在正常条件下，保持未分化的平衡状态，保留多种前体细胞分化的可能性。BMSCs在动物骨髓中广泛存在，是即便在机体组织细胞受到损伤后，其修复过程也可以发挥重要作用。因其在体外容易获得和扩增，相较于胚胎干细胞、脐血干细胞或神经干细胞，伦理学限制较少，易于实验室工作的大范围展开，因其具有多向分化潜能，可以进行造血支持且可以促进干细胞移植，在体内或者体外诱导条件下，可增殖进而分化为骨、软骨、肌肉等多种细胞[3]，BMSCs在适宜条件下分化为成骨细胞，而成骨细胞是生物体内促进骨生成的重要细胞，它会分泌骨基质，进而骨基质矿化后会形成新的骨。因此，骨髓间充质干细胞在骨类疾病和骨的再生等的细胞治疗方面有着十分重大的应用前景，为了使其更易在临床上应用，对其培养的研究至关重要，为了使其培养时能够高效的表达和增殖，与载体复合时有更好的粘附性，对作用于BMSCs和成骨细胞的因子进行研究，以此更好的应用于相关骨病的治疗。

此前有实验表明Rho激酶抑制剂Y-27632对大鼠骨髓间充质干细胞增殖进行干预，并促进其向成骨细胞分化[4]，但对成骨细胞和骨髓间充质干细胞细胞形态的影响还尚未完全清楚，故采用细胞形态计量学，对细胞表面的形态作定量分析，从而克服了传统形态描述的不足，提高对细胞描述的客观性、准确性[5]。实验分别对成骨细胞和骨髓间充质干细胞细胞形态进行Rho激酶抑制剂Y-27632的干预，观察其细胞形态，期待探寻出对细胞形态的影响，以便在后续研究中探究Rho激酶抑制剂Y-27632对细胞增殖及迁移的影响，以此更好的应用于相关骨病的治疗。

1 材料与方法

1.1 细胞来源 

4周龄雄性SD大鼠一只，重130-170g，初生SD乳鼠（三天以内）一只，由徐州医科大学动物实验室提供。

1.2 主要试剂

试剂名称 厂家

Rho激酶抑制剂Y-27632 美国Gibico公司

DMEM高糖培养基 上海苏懿化学试剂有限公司

DMEM低糖培养基 上海苏懿化学试剂有限公司

胎牛血清 美国 Hyclone公司

胰蛋白酶 上海苏懿化学试剂有限公司

双抗 美国Hyclone 公司

PBS 美国Hyclone公司

罗丹明-鬼笔环肽