DAPI染液 上海碧云天生物技术有限公司

1.3 仪器设备

CO2培养箱（美国Thermo公司）、 倒置相差显微镜（IX71 型，美国 OLYMPUS 公司）。

1.4 成骨细胞的分离与培养[6-7] 

取新生的SD大鼠（出生1-3天内）用75%酒精溶液浸泡5 min，取出头盖骨，用DMEM高糖培养基洗涤乳鼠头盖骨，反复多次，将头盖骨剪成2～5 mm2的碎片，使其均匀地分布在培养瓶底面，将培养瓶于细胞培养箱（37℃，5% CO2）中倒置，过夜后正置，每隔2天左右更换新鲜培养液，直至细胞爬满大部分瓶壁。源`自·优尔"文'论:文'网,www.youerw.com用胰蛋白酶进行消化，用吸管将细胞吹散，细胞传至第三代可用于实验，倒置显微镜下观察细胞生长状况。

1.5骨髓间充质干细胞细胞的分离与培养[8-9]

取4周龄SD大鼠一只，断颈法处死，用75%的酒精溶液浸泡，约10分钟。在超净工作台中取下股骨与胫骨，剔除表面附着的软组织及肌肉，暴露出骨髓腔，用10 mL注射器吸取含10%标准胎牛血清及20%双抗的DMEM低糖培养基冲洗骨髓腔，重复该动作多次，直至骨髓腔泛白时，收集细胞，接种于培养瓶中，轻轻吹打使其混匀，并标记为P0代。放置于80%相对湿度、5% CO2、37℃培养箱内进行培养。至第三天更换新鲜培养液，用来除去残存杂质及未贴壁的细胞，每次间隔2-3日即可换液，当细胞生长约80%融合时即可用胰蛋白酶进行传代。本实验选用P3代细胞，备用，在倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况。