摘  要：为了选育高产纤维素酶生产菌达到缓解纤维素酶短缺的现状。利用实验室保藏的黑曲霉W1为出发茵株，经过紫外线和常压室温等离子体复合诱变，选育出高产纤维素酶菌株。在适宜的条件下，通过复合诱变得到的黑曲霉突变株M2的酶活明显提高，突变株M2在30oC，150r/min培养72h后羧甲基纤维素钠酶活最高达到26500 U·g-1，出发菌株W2培养72h酶活达到10900 U·g-1，突变株较出发菌株酶活力提高2.43倍。黑曲霉诱变菌株具有较强的分泌纤维素酶的能力。54242

毕业论文关 键 词：黑曲霉，纤维素酶，酶活力，诱变

Abstract: The research aimed to breed the high-yield production strain of cellulose to alleviate the shortage of cellulase. Laboratory preservation of Aspergillus niger W1 was used as the starting strain, and a high-yield production strain of cellulase was selected after compound mutation of UV and ARTP. Under the suitable condition, the CMC vitality of W2 strain through compound mutation improve significantly, and the enzyme activity of mutant strain W2 was highest (26500 U·g-1) after culture 72h with 150r/min at 30oC and that of starting strain reached 10900 U·g-1 after culture 72h. The CMC vitality of W2 strain selected could be 143% higher than that of starting strain. The mutant strain of A.niger had stronger ability of secreting cellulase.

Keywords：Aspergillus niger, Cellulase, Enzyme activity, Mutation

目录

摘  要 3

1 前言 6

2 材料与方法 8

2.1 材料 8

2.1.1 出发菌株 8

2.1.2 仪器 8

2.1.3 培养基 8

2.2菌种活化 8

2.3方法 9

2.3.1孢子悬液的制备 9

2.3.2 菌株诱变处理 9

2.3.2.1 紫外线诱变 9

2.3.2.2 ARTP等离子体诱变 9

2.3.3 诱变菌种的筛选 9

2.3.4 酶活的测定 10

2.3.4.1 粗酶液的提取 10

2.3.4.2 羧甲基纤维素酶活力的测定 10

2.3.4.3 纤维素酶滤纸活性的测定 10

3. 结果与分析 11

3.1 葡萄糖标准曲线的绘制 11

3.2 不同紫外线诱变黑曲霉黑曲霉致死率统计结果 11

3.3 不同时间ARTP等离子体诱变时间黑曲霉致死率统计结果 12

3.4出发菌株与突变株的纤维素酶活比较 13

结论 14

参考文献 15

致谢 17

1 前言

随着化石燃料的短缺，如今，能源成为人类面临的共同问题。寻找新的能源关系到经济的可持续发展乃至人类的生存问题。地球上每年光合作用产生大于100亿t植物干物质，其中一半以上是纤维素和半纤维素[1]。纤维素是广泛存在于自然界中的一种由许多葡萄糖基组成的大分子物质, 可被存在于微生物中的纤维素酶所降解。纤维素分解的研究对纤维素资源的开发利用具有重要意义。自然界中广泛存在产纤维素酶的微生物，包括细菌、真菌、放线菌等都可以生成纤维素[2]。应用于纤维素酶生产的只有木霉属、曲霉属、青霉属、镰孢菌属等菌种,这些菌株可以通过基因工程生产出高活性的纤维素酶[3]，也可以通过各种物理和化学诱变产生能稳定遗传的纤维素酶高产菌株。