摘要透明质酸是一种天然的粘多糖，它在医药和化妆品领域都有非常广泛应用，而兽疫链球菌是工业上用微生物发酵生产透明质酸的常用菌种之一。本课题的目的是要通过基因敲除的方法或诱变的方法解决兽疫链球菌在发酵过程中会产生β-溶血素和透明质酸水解酶等毒力因子的问题，并用基因工程的方法导入HA合成途径中的关键酶(如HasA、HasB等)增强透明质酸的合成量，最后对兽疫链球菌的发酵条件进行优化以提高兽疫链球菌透明质酸的发酵产量，最终达到工业化生产的要求。63943

毕业论文关键词    兽疫链球菌    透明质酸    Has基因    发酵   

毕业设计说明书（论文）外文摘要

Title   Construction of secretion of hyaluronic acid genetically engineered bacteria 

Abstract Hyaluronic acid is a natural mucopolysaccharid, it has a very wide range of applications in the field of pharmaceutical and cosmetic. What’s more, 

Streptococcus equi is one of the most commonly used strains of industrial microbial fermentation production of hyaluronic acid. The purpose of this paper is to knockout the gene of β-hemolysin and hyaluronic acid hydrolase by Homologous recombination or mutation breeding, which will has bad effects on the fermentation of Streptococcus equi And we will import gene of the key enzymes in the HA biosynthesis pathway (e.g. HasA, HasB, etc.) to enhance the synthesis of hyaluronic acid through genetic engineering methods. Finally, optimized the conditions of Streptococcus fermentation in order to improve the production of hyaluronic acid fermentation by Streptococcus, and to achieve ultimately industrial production requirements.

Keywords: Streptococcus equi  hyaluronic acid  has gene  fermentation

目录

1  引言 1

1.1  透明质酸（HA）的概述 1

1.2  HA的分布 1

1.3  HA的生物合成 2

1.4  HA合成酶家族 3

1.5  HA的应用 4

1.6  HA的工业生产 4

1.7  HA工程菌的构建 5

1.7.1  诱变育种 5

1.7.2  基因工程育种 5

1.8  本实验研究思路 6

1.9  展望 7

2  实验材料 8

2.1  菌株和质粒 8

2.2  培养基 8

2.3  溶液配制 9

2.4  主要试剂 9

2.5  主要仪器及设备 9

3  实验方法及步骤 10

3.1 菌种的保藏 10

3.2 兽疫链球菌染色体DNA的提取 11

3.3 目的基因的获取 11

3.4 PCR扩增目的基因 12

3.5 琼脂糖凝胶电泳并回收目的基因 12

3.6  透明质酸水解酶基因（Hyl）的敲除 13

3.7 诱变法筛选无β-溶血素和Hyl基因的菌株 14

3.8 大肠杆菌感受态细胞的制备及电转化