在早先的研究中，大量的商业纤维素酶被用来考察其离子液体耐受性。然而大部分的纤维素酶，包括从里氏木霉来源的酶，在离子液体浓度高于20%(v/ v)时即迅速失活[9]。同时一些来源于宏基因组及环境分离菌株的纤维素酶的离子液体耐性也正在被大量研究[10]。值得一提的是Reddy 从海洋细菌 Pseudoal-teromonas sp 中获得一种耐受离子液体的纤维素酶，并将其成功应用到原位纤维素预处理/酶解的体系中[11]。文献综述

    同时， 有文献报道从嗜热微生物中获得一种糖苷水解酶，该类酶能够耐受高达30%的离子液体，这表明极端微生物可以作为特殊水解酶的重要开发来源[12]。然而目前针对耐受离子液体的纤维素酶的研究只要基于一些疏水基团的离子液体，这些溶剂虽然本身的生物毒性低但对木质纤维素预处理的效果较差，不能很好的溶解纤维素，从而降低了其在产业中的实际应用价值。

    为了进一步拓展离子液体中的原位酶解技术，开发并发酵生产能在高浓度离子液体中存活的纤维素酶具有重要意义。降解木质纤维素的微生物经常处于一些恶劣的环境中，因此在这些微生境开发具有压力耐受性的微生物或纤维素酶具有极大的概率性。

He 课题组报道从土壤中筛选获得一种新颖的耐受  N-methyl-morpholine-N-oxide 的纤维素酶产生菌株Galactomyces sp. CCZU11-1[13]。来源于极端微生物的酶通过长期的进化得以适应特殊的微生境，通常具有耐受特殊环境的特性。因此从极端环境中筛选特殊微生物及其产生的纤维素酶离子液体耐受性是一种切实可行的研究方案。

离子液体是一类非挥发性盐溶液，研究表明某些离子液体能够大量溶解纤维素类碳水化合物。作为近年新兴的一种木质纤维素预处理方式，离子液体预处理能有效降低纤维素的结晶度及聚合度，提高纤维素酶解效率。但离子液体对纤维素酶的毒性是限制该技术得以应用的关键问题。本研究拟从长期受到化学污染的土壤微环境中筛选分离能够耐受离子液体的纤维素酶产生菌，进一步考察相应纤维素酶的离子液体耐受能力，以期获得能够高度耐受离子液体的新型纤维素酶[13]。

2 材料和方法

2.1 材料

2.1.1 土样来源

化工厂排污口附近富含枯枝败叶的土样。

2.1.2 实验仪器

表1 实验所用主要仪器

实验仪器名称 规格型号 生产厂家

取样器 P5000，P1000，P200 Gillson

高压灭菌锅 YXQ.SG41.280 上海医用核子仪器厂

电磁炉 IH—P70 富士宝

数字恒温水浴锅 HWS24 上海一恒科技有限公司

摇床 HYG 上海欣蕊自动化设备公司

恒温培养箱 DHP—9082 上海一恒科技有限公司

电子天平 PL2002 梅特勒—托利多公司

鼓风干燥箱 DHG—9023A 上海一恒科技有限公司

pH计 Delta320 梅特勒—托利多公司

可见分光光度计