2。2。3 Cre／loxP系统的工作流程 

我们可以使用该卡的Cre / loxP系统来实现在一定条件下的体内特定基因敲除中的应用，但需要两个转基因小鼠。首先，我们一般使用在所述第一获得的第一小鼠胚胎干细胞技术构建体外的靶基因，靶基因的含有该基因序列的两端一个loxP位点，之后，已知良好的体外基因序列段到胚胎干细胞中，为了通过同源重组在原始基因序列的细胞碎片的基因组中替换它。后这样处理过的重新植入到假孕小鼠的子宫中，以便在假孕小鼠重新开发成一个完整的胚胎，并最终成为的转基因小鼠重组的胚胎干细胞。内只转基因小鼠和发现loxP位点被引入到相应的基因的内含子，引入这样的理论的，不影响相应的基因的功能，所以在正常情况下，鼠标的表型是正常的。其次，只有我们一般使用的转基因小鼠注入卵母细胞或胚胎干细胞技术的第二只小鼠获得获得，Cre重组酶被置于下一个特定基因启动子调控可制成其在某些特定的条件下表达基因。最后，这两个小鼠同时交配以产生含两个基因型的小鼠的后代的小鼠起作用的特定基因将在特定类型的细胞中删除。

第三章 实验试剂及仪器

3。1实验仪器

仪器 生产厂家

PCR仪 C1000 TOUCH Thermal Cycler Thermo Scientific

电泳仪EASYCAST Bio-rad

凝胶成像仪Gel Doc XR+ Bio-rad

微波炉 SANYO

移液枪SL-20XLS、SL-200XLS、SL-1000XLS Ruinin

冰箱BCD-258WBX 青岛海尔股份有限公司

超低温冰箱DW-YL270 中科美菱

体式显微镜  Nikon SMZ1500

涡旋震荡仪 VWR

电子天平BSA2242 赛多利斯

Thermo-shaker Thermo Scientific 

微型离心机    Bio-rad

3。2 实验试剂 

Premix Ex Taq Sigma

Tris Sigma 

TE（Tris、EDTA） Sigma 

PBS（NaCl、Na2HPO4、KH2PO4、KCl） Sigma 

TAE（Tris、EDTA、NaOAC） Sigma 

DNAGreen染料 Sigma

DM5000 康为世纪

PFA(Methanal、HCl) Sigma

75%、100% Ethanol Sigma 

OCT thermo

酚氯仿 杭州诺扬生物技术

NaOH Sigma 

第四章 实验方法

4。1 小鼠特性

小鼠属于哺乳动物，我们一般实验用的小鼠都来源于野生型的小鼠。

4。1。1。1 生物学特性

（1）小鼠本身性情很温顺，一般不主动咬人，除非遇到攻击性的行为时，才会进行斗争，一般常咬伤背部和尾部。

（2）通过生活常识，我们知道小鼠一般在晚上出来活动和进食，一般起交配一般也段发生在晚上，即在夜晚小鼠的活动比较频繁和活跃。