摘要AFLP(扩增片段长度多态性)是一种基于PCR 的高分辨DNA 指纹分析方法,是一种新的DNA 分子标记技术。通过采用AFLP技术,建立一套高效、准确的室内鉴定技术, 为稗草种的真伪鉴别提供一种可靠的方法。64对EcoRⅠ/Mse 1 引物中筛选出10对分辨率高的引物。用这10对引物对稗草进行AFLP分析,得到清晰的相关AFLP 谱带。其中两对引物对稗草的区分能力强,对稗草有较高的检测效率。关键词 稗草 AFLP 筛选 鉴定10510
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Title Preliminary study of AFLP molecular markers to identify barnyard grass,in Jiangsu Province
Abstract
Amplified fragment length polymorphism (AFLP) is polymerase chain reaction (PCR) -based marker with high-resolution for the rapid screening of genetic persity. It is a new DNA fingerprint technology aspects in AFLP。Through the use of the AFLP technique to establish an efficient, accurate identification of indoor technology, we can provide a reliable method for the authentication of the barnyard grass species. 10 pairs of high resolution of primers are selected from 64 pairs of EcoR Ⅰ / Mse 1 primers.The barnyard grass species was analyzed by the AFLP marker techniques with 10 pairs of EcoRⅠ/Mse 1 primer combinations. Two pairs of primers have strong distinguish ability of barnyardgrass and have a higher detection efficiency on Barnyard grass
Keywords Barnyard grass AFLP select identify
目 次
1 引言 1
1.1稗草的简介 1
1.2稗草种子培育过程 1
1.3 AFLP技术简介 2
1.3.1 AFLP技术定义 2
1.3.2 AFLP技术的原理 2
1.3.3 AFLP技术流程 3
1.3.4 AFLP技术优缺点 4
1.3.5 AFLP 标记的关键技术 5
1.3.6 AFLP技术展望 6
1.4 本研究的目的和内容 7
2 材料与方法 7
2.1 试验材料 7
2 .1.1 植物材料 7
2.1.2 仪器材料 7
2.1.3 生化试剂与配制 8
2.2 试验方法 10
2.2.1AFLP引物的筛选 10
2.2.2正式实验 13
2.2.3银染实验 13
3 结果 14
3.1 引物筛选结果 14
3.2 正式实验的结果16
结 论 19
致谢 20
参考文献 21
附图 23
1 引言
稗草,生长茂盛,所有条件下稗草的相对生长速率都显著高于水稻的相对生长速率。利用AFLP技术可高效准确的鉴定筛选出稗草,从而提高水稻产量。AFLP是由荷兰科学家Zebeau发现,并由Vos发展起来的一种检测DNA多态性的一种方法。该方法是继RFLP、SSR和RAPD之后发展最快的DNA指纹技术,是DNA指纹技术的重大突破,也是目前国际上最新最适用的DNA指纹技术。
1.1 稗草的简介
稗草,一种极像水稻的杂草。适应性强,生长茂盛,多生于沼泽、沟渠旁、低洼荒地及稻田中,品质良好,饲草及种子产量均高。它是一种一年生草本植物,长在稻田里或低湿的地方,形状似稻但叶片毛涩,颜色较浅,主脉清楚,是稻田的害草[1]。稻子,一种谷类植物,有水稻早稻之分,有硬壳,经碾制就是大米。由此可以看出稻子和稗子,外形颇为相像,一样的绿色,一样的享受着阳光,和土地的滋润。但是,它们的用途却是截然相反。一个被碾制成大米,供人们食用,给人类带来利益,为人类所歌颂,而稗草却不同,穿着一身和稻子一样的衣服,吸取着土地里本应输给稻子的养份,却不能为人类造福。不同类型不同密度的水稻与一定密度的稗草混合种植 ,结果表明:在低密度条件下稗草的生长速率显著高于水稻 ,而在高密度条件下水稻的生长速率显著高于稗草;随着种植密度的增加 ,水稻的生长速率逐渐增大而稗草的生长速率逐渐减小。所有条件下稗草的相对生长速率都显著高于水稻的相对生长速率[2,3]。