本次实验所用的菌株来源于葎草叶子中分离得到的一株产纤维素酶内生菌 G8， 在前期产酶培养条件优化的基础上，对该菌株 G8 发酵液中的纤维素酶的酶活特性进行研究，通过测定所产纤维素酶不同组分酶的最适酶促反应温度，最适 pH 以及二价 金属离子对其纤维素酶活力的影响，获得 G8 菌株纤维素酶的相关特性，并采用硫酸 铵盐析法进行初步提纯，以为后期 G8 菌株所产纤维素酶的利用提供参考。

第二章 实验材料与方法

2。1 实验材料

2。1。1 菌株来源

实验室斜面试管里保存的从葎草叶子里分离出来的植物内生菌 G8。

2。1。2 实验试剂与器材文献综述

（1）实验药品及试剂 琼脂、葡萄糖、酵母膏、NaCl、KH2PO4、MgSO4•7H2O、柠檬酸、氢氧化钠、

蒸馏水、乙醇、CMC-Na、水杨苷、Na2HPO4•12H2O、MnSO4•H2O、ZnSO4•7H2O、 FeSO4•7H2O、(NH4)2SO4、CuSO4•5H2O、3, 5-二硝基水杨酸、酒石酸钾钠、苯酚、无 水亚硫酸钠、考马斯亮蓝 G-250、磷酸、牛血清蛋白、乙酸铵等，购自国药化学试剂 有限公司。

（2）实验器材

超净工作台 SW-CJ-IF 苏州安泰空气技术有限公司

分光光度计 UV-9600 上海凤凰光学科仪有限公司

恒温水浴锅 HH-4 江苏金坛市中大仪器厂

电子天平 YP5001 上海海康电子仪器厂

温控摇床 DHZ-052D 上海博彩生物科技有限公司

冷冻离心机 TGL-16G 上海安亭科学仪器厂

恒温培养箱 SPX-250B-D 上海予腾生物科技有限公司

pH 酸度计 PHSJ-4A 北京莱博联泰科技有限公司

高压蒸汽灭菌锅* YX-280B 上海三申医疗器械有限公司

电磁炉 C19-SH1982 广东美的生活电器制造有限公司

烘干箱 DHG 9240A 上海一恒科学仪器有限公司

2。1。3 培养基

（1）活化培养基（PDA 培养基）：

准确称取去皮马铃薯 200g，用电磁炉加入蒸馏水煮沸 20min，补充水至 1L，加 入蔗糖 20g，琼脂 12g，121℃灭菌 20min，冷却至合适温度时，在无菌操作台倾倒平板，自然冷却凝固后备用。

（2）液体发酵培养基

准确称取 50。0g 葡萄糖，10。0g 酵母膏，20。0g KH2PO4，20。0g NaCl，0。20g MgSO4， 溶于 2000 mL 蒸馏水，并调 pH=7。5，分装 20 个 100mL 的三角锥形瓶，进行密封处 理，并于 121℃灭菌 20min 后取出冷却备用。

2。1。4 主要试剂的配置

（1）葡萄糖标准溶液

准确称取 100。0mg 分析纯的无水葡萄糖(预先在 70℃干燥至衡重)，用少量蒸馏水 溶解后，定量转移到 100mL 容量瓶中，再定容到刻度，摇匀，浓度即为 1mg/mL。

（2）DNS 溶液

准确称取 NaOH14。0 g，3,5-二硝基水杨酸 7。5 g，并依次加入 NaOH、 3,5-二硝 基水杨酸，充分溶解于 900mL 蒸馏水中（蒸馏水需先用电磁炉煮沸 10min，以除去 水中溶解氧），然后冷却至室温。然后称取酒石酸钾钠 216。0 g，苯酚（在 50℃水浴中 融化）5。5 mL，无水亚硫酸钠 6。0g 加入上述液中，充分溶解后定容至 1000mL，并盛 于棕色瓶中，避光室温存放，放置 1～5 天后便可使用。（注意：配置过程中，溶液加 热温度不宜超过 50℃。）