但是硼酸结合物防治青霉病却有先例，不同浓度的6%~8%的硼砂溶液可控制柑橘青霉病，且效果溶液温度有关，四硼酸钠对枣果中扩展青霉的防治工作也十分的重要。硼酸处理过的番茄储存30天，无腐烂现象；而不处理的腐烂现象严重。有文献报道，采后硼处理可有效减轻桃果实果心褐变程度，显著抑制采后红枣青霉病的发生。硼酸在葡萄、核果的采后防治工作中也扮演着重要的角色。除此之外，在果实成熟期，喷释硼酸也可减低水果采后腐烂程度。近期研究表明硼酸钾可以有效地控制灰葡萄孢（Botrytis cinerea）引起的葡萄的采后灰霉病。硼酸钠也能显著的抑制核果链核盘菌（Monilinia laxa）的生长。

本实验通过分离发病苹果果实中的菌种，并进行鉴定。再确定研究抑菌剂硼酸的最低抑菌浓度，将这个最低抑菌浓度运用到HPLC实验中检测硼酸对patulin的具体影响作用，并通过测定patulin合成相关基因表达量来研究硼酸对patulin毒素的抑制作用，验证硼酸对青霉菌的抑菌作用。

2 材料与方法

2。1病原菌的分离及rDNA-ITS法鉴定

用75%无水乙醇对发病苹果果实进行消毒，风干后在病斑边缘去除果皮，切取面积约为0。1 cm²右的果肉放到PDA（potato dextrose agar）培养基上，在25 ℃下培养24 h后，于菌落边缘处分离菌种，转移至新的PDA培养基上，25 ℃培养4天，观察后用含有0。05%（v/v）Tween-20的无菌水收集孢子，经4层灭过菌的纱布进行过滤。所有的成熟水果是从中国杭州下沙区的当地市场买的。在25℃下，真菌的病原体展青霉素最初通过一个连放置于PDA平板上的青霉菌隔绝于自然感染苹果（红富士）。这是对苹果、橙、冬枣、番茄和梨上进行实验来进行果实形态特征进行观察。按照制造商的指示，用德国Qiagen公司生产的试剂盒提取病原体的全基因组DNA。rDNA-ITS法是利用真菌ITS通用引物（ITS4：(TCCTCCGCTTATTGATATGC)；ITS5 (GGAAGGT来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766 GTCGTAACAAG)进行PCR扩增，扩增产物经罗氏试剂盒纯化，由上海阳光生物技术有限公司测序。测序结果于http://blast。ncbi。nlm。nih。gov/blast。cgi进行分析。用BLAST成对比对得到了BLAST结果的距离树，参数如下。树方法：邻接;序列最大差异为：0。75；序列标签为：分类名称。

2。2硼酸最低抑菌浓度的测定

收集已经在PDA培养基上正常培养了两周的Penicillium expansum孢子，分别等量加入到4个含有100 mL PDB培养基的250 mL三角瓶中，借助血细胞计数仪调节孢子终浓度为1。0×106spores/mL，分别加入终浓度为0（对照组）、0。15%、0。30%、0。45%的硼酸，并在25 ℃、200 r/min的条件下于摇床上振荡培养。接着分别在培养后6~12小时内，使用光学显微镜观察并统计每个组的孢子萌发率，然后再确认最低抑菌浓度（Minimum inhibitory concentration，MIC）。文献综述本次实验所确定的最低抑菌浓度指的是在相同培养时间内，对照组孢子萌发率≥90%时，处理组孢子萌发率≤10%时的抑菌物质浓度。每种处理随机统计100个孢子的萌发率，重复三次，整个实验重复两次。

2。3 RP-HPLC法测定P。 expansum侵染的苹果果实中Patulin含量

实验操作简述如下：为了检测展青霉素的产生，一个1×109 spores/L的P。 expansum孢子悬浮液（100μL）被均匀地涂布在25ml含有0或者0。3%BA的直径为9厘米PDA培养基的培养皿中。在25℃下进过2、4、6天的培养，10个直径为5mm的琼脂块（总重约10g）被随机获取来进行以下分析。