食用甲鱼的胚胎常暴露于极端高温下[1],热耐受能力是决定其存活的关键因子之一。在全球变暖以及更严峻的气候异常背景条件下,温度对爬行动物卵的孵化及其孵出幼体特征和功能方面将会有更深刻的影响。

甲鱼养殖业重点关注的另一个问题是孵出幼体质量如何影响其后续的生长[2]。尽管孵化温度可使得胚胎发育的速度达到最大,但通常不会使后代表型达到[3]最佳。很多的研究表明,爬行动物胚胎所经历的热环境对幼体表型特征有精细地影响,包括个体大小、形态、能量储存、行为和胚后生长影响,而对爬行动物孵出幼体免疫功能的研究更加稀少。

1。2嗜水气单胞菌的简介

在本次实验研究低强度温度变化孵化对食用甲鱼的抗菌能力中所用的是嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophilia),是弧菌科气单胞菌属,为革兰氏阴性短杆菌,极端单鞭毛,没有芽胞和荚膜。嗜水气单胞菌是革兰氏阴性的短杆菌,两端钝圆,直形或略弯。大多数细菌能在37 °C生长,在液体培养基中具极生单鞭毛,能运动,兼性厌氧。生长的适宜pH值大致在5。5~9。0。嗜水气单胞菌在普通营养琼脂培养基上生长良好,菌落边缘整齐,呈圆形,表面湿润,光滑,隆起,半透明,乳白色至奶黄色。菌落的大小与培养时间及温度有关[4]。

嗜水气单胞菌是多种水生动物的原发性致病菌。它广泛分布于自然界的各种水体,是条件致病菌,也会引起人体感染疾病。因此它也是典型的人-兽-鱼共患病病原菌。嗜水气单胞菌在水温14。0~40。5 °C范围内都可繁殖,以28。0~30。0 °C 为最适温度。论文网

据相关研究表明,嗜水气单胞菌会引起甲鱼败血症。而甲鱼坏血症是引起甲鱼养殖业减产的主要疾病。当环境突然恶化或是水质恶化时,嗜水气单胞菌常会与其它致病菌混合感染使感染的病体的病情加重。由于嗜水气单胞菌感染的疾病病势一般较猛,而且多为恶性传染病,最后很可能导致养殖过程中的甲鱼大规模的死亡,而且死亡率极高。食用甲鱼嗜水气单胞菌感染的临床病型有多种[5]。例如局部感染为主的皮肤溃疡、疖疮等,腹底板瓷白色为特征而出现了白底,而更多见且危害又最严重的是急性出血性败血症,故预防嗜水气单胞菌的感染是食用甲鱼养殖过程中非常重要的一个环节。已有研究表明,嗜水气单胞菌能够入侵生物体并诱发败血症等疾病与该菌分泌的外毒素[6]有关。这些毒素包括溶血素(haemolysins)、肠毒素(enterotoxin)、细胞毒素(cytotoxin)。嗜水气单胞菌的毒力因子一部分分布于细胞膜表面。还有一些分泌在胞外的一些具有溶血活性的毒力因子也是其致病性的原因[7]。包括丝氨酸蛋白酶(serineprotease)、金属蛋白酶(metalloprotease)、转铁蛋白等胞外蛋白酶(exoprotease)。

2材料与方法

2。1 实验材料

2。1。1菌株和培养条件

实验所用的致病菌嗜水气单胞菌TL1是从一只来自中国浙江某个甲鱼厂中生病的食用甲鱼的肝脏中分离得到的,28 °C条件下将TL1培养在LB(Luria-Bertani)液体培养基中。

2。1。2甲鱼卵的来源

实验所研究的甲鱼卵来自杭州某甲鱼养殖场新生的甲鱼蛋,随机选取挖蛋地点,在预算实验所需用蛋量的基础上,考虑甲鱼蛋受环境因素及自身因素的孵化率情况,以及运送过程中的甲鱼蛋破损量,尽可能多挖一些甲鱼蛋以保证实验充足蛋源。经过各种挑选,最终选取480只甲鱼卵作为最终实验用蛋,实验组和对照组分别为240只。

2。2实验方法

2。2。1食用甲鱼卵孵化

将食用甲鱼受精的蛋用电子天平称量精度至±1mg。分别对应编号,并测卵径,记录测量数据。

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