1.2.3 电化学分析法
电化学分析法被应用于溶解氧的测定是近几年才发展起来的。电化学法的精度可优于±5 微克 /升。近年来有关这方面测量技术的报道有:示波滴定法测定溶解氧[ 17],此法水样处理同碘量法,能用于被测物极少或水样浑浊情况下,适于野外鱼塘中的溶解氧单次测定。文献[18]的伏安法仍采用两电极系统,铂丝作阴极。该法灵敏度较高,简便、快速,但是每次测量前电极的活化处理使其难以实现无人操作下的连续使用
1.3 传感器法
水中溶解氧的测定方法历来以化学法为主。相比之下,膜电极法灵敏度高,对氧浓度变化响应快,可进行动态连续测定,方法简单,电极制造容易,成本较低廉,能适应污水、深颜色水等环境的要求,故自隔膜式电极问世以后,化学法逐步被传感器法所替代[19~22]。目前已有各种形式的膜电极商品化,并且技术也日益成熟,膜电极的测定下限已达0.1mg/L,但膜电极的响应值须进行标定,已有许多简单标定方法,并能对温度进行自动校正。
2微生物群落分析方法
2.1传统微生物平板培养方法
传统的微生物平板培养法就是根据目标微生物选择相应的专性固体培养基进行分离培养,然后通过各种微生物的生理生化特征、外观形态及其菌落数来计测微生物的数量及其类型[23 ] 。平板计数法仍然是一个评价污染效应的有效方法[24 ,25] 。Busse 等[26] 用平板计数法研究了草甘膦除草剂对造林土壤中微生物群落结构及其代谢特性的影响,测定结果表明,草甘膦除草剂对细菌和真菌有毒害作用,提高除草剂含量,降低了培养基中存活细菌的生长速率和代谢多性。
该方法也存在许多不足之处[23 ,27] 。首先,微生物对培养基具有选择性,不可能用有限的几种培养基培养获得土壤中所有的不同生理类群的微生物,同时培养基的成分也影响微生物的生长状况[28 ] 。其次,实验室的培养条件不可能用同一种方法同时满足所有微生物对温度、pH 以及通气状况等条件的要求,从而用某一种特定条件不能培养出来那些不适应条件的微生物[29 ] 。而且,许多微生物在环境变化过程中表现出一种“存活但不能培养”(Viable but nonculturable , VBNC) 的状态,在这种状态下,细胞不能在传统的培养基上生长,但仍然处于存活状态,并在一定条件下可以恢复代谢活性并转入可培养的状况[30 ] 。因而,利用平板培养法不可能全面地获得土壤中所有微生物的全部信息,只能获得一小部分土壤微生物群落。因此,这种传统的平板培养方法只能作为一种辅助工具,需要结合现代生物技术方法才能更客观而全面地反映微生物群落结构的真实信息[31 ] 。
2.2磷脂脂肪酸(PLFA) 谱图分析法
磷脂脂肪酸(Phospholipid Fatty Acid ,PLFA) 是构成活体细胞膜的重要组成部分,其含量在自然条件下是相对恒定的。不同类群的微生物能通过不同生化途径形成不同的PLFA ,部分PLFA 总是出现在同一类群的微生物中,而在其它类群的微生物中很少出现,细胞死亡后数分钟到数小时内细胞膜水解和释放磷生物生物量和群落组成各不相同,每种样品具有独特的PLFA 谱图(包括PLFA 总量、组成) ,即具有专一性;不同样品的谱图之间差别很大,具有多样性。PLFA 谱图的变化能够说明环境样品中微生物群落结构的变化。因此,磷脂脂肪酸分析十分适合于土壤微生物群落的动态监测。PLFA 分析法是用氯仿2甲醇2柠檬酸缓冲液(1∶2∶018) 提取土样的脂类,用柱层析法分离得到磷酸酯脂肪酸,然后经甲酯化后用气相色谱分析各种脂肪酸(C52C20) 的含量。