(8)热压流体萃取法
热压流体萃取法是一种快速、环保、便宜、有效地萃取生物活性物质的方法。通过热压水萃取的样品中当存在表面活性剂时萃取物的固体含量更高,当使用热压脂溶萃取时,7种黄酮类化合物的含量在脂溶萃取中超过了水溶萃取。
(9)高压液相提取法
Ying Zhang等通过高压液相萃取法从鱼腥草中萃取了黄酮类化合物,研究了乙醇浓度、流速、温度和压强等因素的影响,并与热浸法和超声波辅助萃取法进行对比,发现高压液相萃取法提取效果较好,当使用50% 乙醇,溶剂流速为1.8mL/min,温度为70℃,压强为8MPa 时,黄酮类化合物的得率和浓度可以达到3.152% 和23.962%。
(10)膜分离法
膜分离法主要有超滤、微滤、纳滤和反渗透等,其中超滤法是膜分离的代表,它是唯一能用于分子分离的过滤方法,是以多孔性半透膜为分离介质,依靠薄膜两侧压力差作为推动力来分离溶液中不同分子量的物质。由于大多数黄酮类化合物的分子量在1000以下,而非有效成分如大多数的多糖、蛋白质等分子量多在50000 以上,因而使用超滤能有效去除蛋白质、多肽、大分子色素、淀粉等,达到除菌、除热原、提高药液澄明度以及提高有效成分含量等目的。这种方法操作简便、不需要加热、不损坏黄酮类化合物,提取效果好、超滤装置可反复使用。
对于提取得到提取液测定方法也有很多种,如比色法、薄层色谱法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱联用法以及毛细管电泳法。其中比色法比较适于测定总黄酮,但却不适用于单一成分的测定。而高效液相色谱则是测定黄酮类化合物十分有效的方法。它克服了传统定量方法繁琐、费时、分离度欠佳以及GC法的拖尾现象或制成相应衍生物操作繁琐等等缺点,它的分离效率很高,在这类化合物中的应用则日趋增多。高效液相色谱-质谱联用法是为黄酮类化合物的指纹图谱的建立提供了高效准确的方法。对于毛细管电泳以高效、快速、进样量少、节省溶剂、重现性好、不易污染等优点,近几年在黄酮类化合物的分析中得到了较大的发展。这些方法各具有优缺点,具体的选择还是以实际的实验需求来确定[5]。
虽然从各种植物中分离、提取了大量的新黄酮类化合物,掀起了黄酮类化合物的研究热潮,但是对其吸收、代谢机制、活性机理,具有生理功能的活性基团、稳定性等方面仍缺乏全面的认识。除此以外,对黄酮类化合物本身的抗氧化性以及该类化合物与摄入量、金属离子催化之间的关系也处于激烈的讨论中。所以应加强此方面的工作,并弄清其生理功能,从而以较先进的检测分析手段功能成分进行定性和定量分析,确定这些功能成分的提取工艺。为黄酮类化合物的进一步开发利用奠定更加厚实的基础。
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