3超临界流体萃取法[10]

超临界流体萃取法是利用临界或超临界状态的流体和需要被萃取的物质之间在不同的蒸汽压力下存在不同的化学亲和力和溶解能力，进而利用该不同的性质进行分离纯化的操作，尤其是超临界CO2萃取结晶技术，是对传统超临界流体萃取技术的创新。该技术克服了传统的超临界流体技术易造成管道堵塞和纯化效率低的缺点，同时由于萃取结晶的同步化，能更好地提高分离纯化的效率。这种分离方法特别适用于医药和食品工业。按照有无夹带剂的情况，又可分为无夹带剂和有夹带剂两类方法。超临界流体萃取方法的优点是产品的回收率较高、产品质量好、有效成分破坏少、无溶剂的残留、操作方便等。但是超临界流体萃取法设备规模较大、技术要求高、投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。已报道超临界流体萃取的工艺路线主要是直接以马尾松树皮为原料进行萃取的，称其为直接萃取法。

4微波提取法[11]

微波提取法是通过微波辐射过程产生的高频电磁波穿透萃取介质，到达物质内部，由于吸收微波能，细胞内迅速升温，细胞壁压力增大使其膨胀破裂，有效成分流出，溶解到提取剂中，通过进一步过滤和分离，得到萃取物质。此外，微波能产生电磁场，且该电磁场能加速被萃取成分向萃取剂界面扩散的速率，该方法的优点是提取时间短、提取率高，是固液提取方法中颇具发展潜力的一项新型辅助提取技术。微波提取技术可以节省大量的提取剂，大幅度的缩短操作时间。但微波升温迅速、较难控制，容易破坏多糖分子结构，造成一定程度的分解失活，影响到产品质量，如何更好地调控时间及温度的平衡显得非常重要。

该方法主要用到的实验试剂和仪器：芦丁标准品、亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝等，均为分析纯。LWMC-205型可调功率微波化学反应器、SHB-3型循环水式多用真空泵、DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱、H。H。S型电热恒温水浴锅、722S型可见分光光度计、FA1604N型电子天平、UV-2550型紫外可见分光光度计、360型FTIR红外光谱仪等。

该方法的实验步骤：将马尾松树皮干燥后粉碎（过40目筛），准确称取3。00g粉末置于锥形瓶中，加入定量蒸馏水，摇匀，以保鲜膜封闭瓶口，设置微波功率为350W，间歇微波作用3次，每次40s，再置于60℃水浴中浸提4h，减压抽滤，滤液定容至100mL，摇匀，为供试品溶液，然后固定其它条件不变，依次考察料液比、微波辐射功率、微波辐射时间、浸提时间、浸提温度对马尾松树皮总黄酮提取率的影响。然后在单因素实验基础上，选择浸提时间、微波辐射功率、微波辐射时间、料液比为考察因素，进一步优化提取条件。

5酶解法[12]

酶解法提取是根据植物细胞壁的构成，利用酶反应所具有的高效性、专一性的特点，选择对应细胞壁的酶，将细胞壁组成成分水解，从而达到破坏细胞壁结构的目的，使细胞壁中的有效成分溶出最终达到提取黄酮类化合物的目的。酶解法提取环境温和，操作简单，同时还能有效保护提取成分，提高目标产物的药用价值，可用于马尾松树皮中黄酮类化合物的工业化提取。但是单独使用酶解法提取效果不理想，所以今后的研究应主要集中在与多种高效的提取方法结合联用的方向上来。

该方法主要用到的实验试剂和仪器：36%乙酸、无水乙酸钠、氢氧化钠、亚硝酸钠、三氯化铝、无水乙醇、芦丁、酶，试剂均为分析纯。HHS21-4电热恒温水浴箱、电子天平、T6 新世纪紫外可见分光光度计等。

该方法的实验步骤：首先根据芦丁标准品绘制出标准曲线，然后将马尾松树皮干燥后粉碎，准确称取3。00g粉末置于乙醇中，加入酶，在温度为50℃，pH值为4。5，加入酶0。5g，酶解时间为1h的条件下提取马尾松树皮总黄酮之后用亚硝酸钠-三氯化铝比色法(同芦丁的吸光度测定方法)测定提取物在510 nm 波长处的吸光度，根据标准曲线的回归方程计算马尾松树皮总黄酮浓度。逐一考察酶解工艺的各个影响因素，如酶的种类及用量、酶解温度、溶剂pH值、酶解时间等。