姜黄素(Curcumin)是从我国传统中药姜黄的根茎部提取出来的一种多醇类的天然酚类色素。在古印度医学中,姜黄用于治疗各种呼吸道疾病、风湿病、糖尿病等[2]。近年来许多研究表明,姜黄素是具有抗癌、抗炎症、抗增殖及抗氧化等药理学活性的多功能生物分子,且对正常人体细胞没有毒副作用。2003年,安鸿志等人对姜黄素的抗肿瘤作用进行了动物的实体实验,他们采用口服灌胃的方法对小鼠S180肉瘤实体型和腹水型进行了抑瘤实验,结果表明,姜黄素剂量为60 g·kg-1时的抑瘤率为43。05%,显著延长了S180肉瘤腹水型实验组小鼠的生存期,剂量为30g·kg-1时的生命延长率则达81。51%[3]。因此,姜黄素是一种能预防治疗恶性肿瘤的极具潜力的药物。HepG2细胞是完成分化的人肝胚细胞瘤细胞系,保留了较完整的代谢酶及其活性。本研究利用不同浓度的姜黄素在相同时间下处理人肝癌HepG-2细胞以及同一浓度处理不同时间,分别分析姜黄素对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响,为之后姜黄素抗肿瘤的应用治疗提供一定的实验基础。

实验材料和方法

1。1材料与仪器文献综述

主要试剂:人肝癌HepG-2细胞,DMEM高糖培养基(武汉博士德生物工程公司),新生小牛血清(四季青),PBS,封口膜(美国Parafilm),WST-1细胞毒性及增殖检测试剂盒(上海碧云天生物技术公司),胰蛋白酶(EDTA,酚红,上海碧云天生物技术公司),青链霉素(美国Gibco公司),DMSO,结晶紫染料(上海生工生物工程公司),姜黄素(Bio Basic Inc)。

仪器:数显恒温水浴锅(DK-8D,上海精宏),Thermo Forma CO2培养箱(HF151,Heal Force),单人双面垂直净化工作台(VS-840-2,上海博讯),Olympus CKX41倒置显微镜(TS100,Nikon),酶标仪(Bio-RAD 680),Sanyo MLS-3750自动高压蒸汽灭菌锅,Milia-Biocel细胞培养级纯水制备系统,称量用各种电子天平等;三洋-80 ℃深低温冰箱,海尔-20 ℃低温冰箱等。

1。2 方法

1。2。1 细胞冻存、复苏与培养

细胞冻存:取对数生长期的细胞(汇合度高于90%)用胰蛋白酶常规消化,加入含20%小牛血清和10%DMSO的细胞培养液制成细胞悬液,用枪吹打混匀,然后分装于专用的冷冻塑料管中(约1毫升每管),标记好冻存人、冻存日期及细胞种类后放入4 ℃的冰箱中,预冷15-20分钟后放入于-80 ℃深低温冰箱保存

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