摘    要CRISPR-Cas9 是一种新兴的基因编辑系统，它为基因组编辑提供了一种简便、高效、多样化的方式。但CRISPR/Cas9介导的DNA定点整合效率仍有待提高。【目的】综合利用环形DNA的高转染效率和线性DNA的高重组率，提高CRSIPR/Cas9系统在基因整合中的效率。【方法】充分利用环形DNA和线性DNA的优点，通过改造CRSIPR/Cas9系统的供体质粒（Donor）序列，使Donor质粒在与CRSIPR/Cas9一起转入细胞时可以形成更有利于同源重组的形态，从而提高Donor质粒在同源重组中的效率，通过观察改造后Donor质粒转染后的荧光表达结果确定定点整合效率是否提高。【结果】在CRISPR/Cas9的识别和酶切下，改造后Donor质粒可被Cas9酶切而线性化，转染后荧光表达结果初步表明改造后Donor质粒可增强定点整合效率。【结论】改造后Donor质粒有利于提高基因整合中的效率。89870

Abstract   CRISPR-Cas9 is an emerging gene editing system that provides a simple, efficient and perse way for genome editing。 But low integration efficiency of CRISPR/Cas9 mediated gene transfer is still need to be improved。 Objective：To improve the efficiency of CRSIPR / Cas9 system in gene integration by using the high transfection efficiency of circular DNA and the high recombination rate of linear DNA。 Methods：By utilizing the advantages of circular DNA and linear DNA, the Donor plasmid can be formed in a more favorable form for homologous recombination when transformed into the cells with CRSIPR / Cas9 by transforming the Donor sequence of the CRSIPR / Cas9 system。 To improve the efficiency of Donor plasmid in homologous recombination and observe the fluorescence expression of Donor plasmid。Results：Under the recognition and digestion of CRISPR / Cas9, the Donor plasmid could be cleaved and cleaved, and the results of fluorescence expression were the same as those of the experiment。Conclusion：CRISPR / Cas9 system is beneficial to improve the efficiency of Donor plasmid in gene integration。

毕业论文关键词：基因编辑； CRSIPR / Cas9系统； 质粒构建； 质粒转染； 荧光表达

  Keyword: Gene editing；  CRISPR / Cas9 system； Plasmid construction； Plasmid transfection； Fluorescence expression

目    录

1。 引言 5

2。 实验材料和方法 5

2。1 实验试剂与设备 5

2。2 实验方法 7

2。2。1质粒抽提 7

2。2。2构建GFP－Donor/m质粒 8

2。2。3连接反应 8

2。2。4 DC-DON-sgRNA体外酶切源Q于W优E尔A论S文R网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201,8766 实验 8

2。2。5质粒转染 10

2。2。6细胞共转染实验 10

2。2。7筛选 11

3。实验结果 11

3。1 Donor-R26质粒酶切电泳和测序验证 11

3。2 Donor-R26体外酶切实验 12

3。3转染最佳实验剂量确定 12

3。4细胞共转染实验荧光结果 13

3。5筛选后荧光结果 15

4。讨论 16

5。结论与展望 17

参考文献 17

致谢