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摘要：研究外源17β-雌二醇对蚂蟥生殖细胞发育的影响。用不同浓度17β-雌二醇（1µg﹒L-1，10µg﹒L-1，50µg﹒L-1，100µg﹒L-1，200µg﹒L-1）水浴养殖二月龄的蚂蟥40d，通过石蜡切片和电镜技术观察蚂蟥性腺组织形态，用高效液质联用仪定性定量內源激素含量。结果表明，不同浓度17β-雌二醇对卵巢的发育均有一定的促进作用，低浓度促进精巢的发育、高浓度抑制；17β-雌二醇均能提高蚂蟥体内雌二醇、雌三醇、睾丸酮、孕酮等激素，但对每种激素的促进程度不同，而且，不同浓度梯度的17β-雌二醇对同种內源激素的促进程度也有差别。29600
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毕业论文关键词：17β-雌二醇；蚂蟥；性腺发育；石蜡切片；HPLC-MS
Effects of exogenous 17β estradiol on germ cell development in Whitmania pigra Whitman
Abstract：To study the effect of exogenous 17β estradiol on germ cell development of Whitmania pigra Whitman. Twenty-four days of W.Pigra were cultured in water baths with different concentrations of 17β-estradiol (1µg﹒L-1,10µg﹒L-1,50µg﹒L-1, 100µg﹒L-1,200µg﹒L-1). The morphology of W.Pigra gland was observed by paraffin section and electron microscopy. Qualitative and Quantitative Endogenous Hormone Content by High Performance Liquid Chromatography. The results showed that 17β-estradiol could promote the development of ovary, and the low concentration could promote the development of testis and high concentration. 17β-estradiol could increase estradiol, estriol, Testosterone, progesterone and other hormones, but the degree of promotion of each hormone is different, and different concentrations of gradient 17β-estradiol on the same kind of endogenous hormone promotion degree is also different.
Key words: 17β-estradiol; W.Pigra; gonadal development; paraffin section; HPLC-MS
目 录
摘要…3
关键词3
Abstract…3
Key words…3
引言…3
1.材料与方法…4
1.1实验材料…4
1.2主要试剂…4
1.3仪器设备…4
1.4实验方法…4
1.4.1实验组别设计和管理方法…4
1.4.2激素提取检测方法4
1.4.3液相条件5
1.4.4 MS/MS条件…5
1.4.5石蜡切片制作方法5
2实验结果与分析…6
2.1性激素检测结果6
2.2性腺组织切片结果…7
2.2.1卵巢组织切片结果7
2.2.2精巢组织切片结果8
3讨论… 10
致谢10
参考文献11
外源17β-雌二醇对蚂蟥生殖细胞发育影响的研究
蚂蟥又称宽体金线蛭。在分类上隶属于环节动物门（Annelida）蛭纲（Hirudinea）无吻蛭目（Arhynchobdellida）黄蛭科（Haemopidae）[1]。经2015版《中国药典》收录，药材水蛭为蚂蟥干燥全体，能破血通经，逐瘀消肿。常用于跌扑损伤，血瘀经闭，中风偏瘫[2]。在现代新兴的研究手段下，蚂蟥更多的医药价值被开发出来，如肿瘤、冠心病、高血压等,还可用于断肢再植的术后辅助治疗。蚂蟥体内的水蛭素除了作为抗凝血剂之外，还能通过抑制凝血酶活性产生抗肿瘤作用来抑制肿瘤细胞的增值及其转移[3]。近年来蚂蟥逐渐成为中成药和保健品行业的新宠，在市场上被广泛应用，市场需求的加大，使蚂蟥养殖也愈加常见，各类养殖方法也在不断的改进和完善。同时，与蚂蟥相关的各种学术研究也在不断的探索深入，主要体现在生理及药理药效方面的比较研究。刘飞等做了蚂蟥口、直肠、精巢、贮精囊、前列腺、输精管、射精球、皮肤等各个器官的组织切片观察[4]；陈立婧等观察了宽体金线蛭的消化道组织[5]；刘宏等详细介绍了蚂蟥不同月龄生殖器官的发育进程，并具体阐述了雌雄性腺的各发育时期[6]。但目前为止鲜见蚂蟥性激素与性腺组织发育的相关研究。因此，本实验在前人探索基础上，观察同一时期的外源性内固醇激素对蚂蟥体内生殖细胞的发育和內源性内固醇激素水平的影响。本研究不仅可以丰富蚂蟥生物学基础研究，同时也为蚂蟥人工繁育提供了科学指导和理论依据。