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    摘要：目的：克隆蚂蟥水蛭素基因（Hirudin），研究吸食对蚂蟥Hirudin表达的影响。方法：克隆水蛭素基因，通过RT-PCR进行定量分析。结果表明：研究发现不同吸食时间水蛭素基因在体内表达量的整体变化趋势相同，都是先升高后下降，但各部位达到峰值的时间不同，唾液腺中第3天时水蛭素基因表达量最高，嗉囊和肠中的水蛭素基因分别在第5天和第7天达到峰值，变化趋势明显，差异显著。结论：蚂蟥体内含有水蛭素基因（Hirudin），吸食行为和外源物质刺激会影响蚂蟥Hirudin的表达。29699
    毕业论文关键词：克隆；水蛭素基因；定量分析；吸食行为
    Study on the cloning of Whitmania pigra Whitman Hirudin gene and the effects of gene expression by sucking
    Abstract：Objective: Cloning the w.pigra hirudin (Hirudin), effect of sucking on the expression of w.pigra Hirudin. Methods: the hirudin gene was cloned and analyzed quantitatively by RT-PCR. The results show that: the study found that different sucking time Hirudin Gene Expression in vivo overall variation trend is the same, but first increased and then decreased, the peak time of different parts, in the salivary gland of hirudin gene expressed in the third day the highest crop and intestinal water in the Hirudin Gene respectively reached the peak on the fifth day and the seventh day, obvious trend, significant difference. Conclusion: the w.pigra body contains Hirudin Gene (Hirudin), sucking behavior and exogenous substances stimulation will affect the expression of leech Hirudin.
    Key words: cloning;hirudin gene;quantitative analysis;sucking behavior
    目  录
    摘要    1
    关键词    1
    Abstract    1
    Key words    1
    引言    1
    1  材料    2
    1.1动物    2
    1.2菌株及载体    2
    1.3仪器与试剂    2
    2  方法    2
    2.1 实验设计    2
    2.2样品的采集与保存    2
    2.3引物设计与合成    2
    2.4RNA的提取与纯化    2
    2.5RNA的鉴定    3
    2.6去除基因组DNA和反转录反应    3
    2.7Hirudin基因的cDNA克隆与测序    3
    2.8生物信息学分析    3
    2.9 Hirudin基因的时空表达分析    4
    3  结果与分析    4
    3.1蚂蟥水蛭素基因同源性分析及构建系统进化树    4
    3.2蚂蟥水蛭素基因的生物信息学分析    5
    3.3不同吸食阶段蚂蟥唾液腺中水蛭素基因相对表达量的变化    5
    3.4不同吸食阶段蚂蟥嗉囊中水蛭素基因相对表达量的变化    6
    3.5不同吸食阶段蚂蟥肠中水蛭素基因相对表达量的变化    6
    讨论    7
    致谢    7
    参考文献    8
    蚂蟥Hirudin基因克隆及吸食对其表达的研究
    引言
    蚂蟥又叫宽体金线蛭（Whitmania pigra Whitman）,隶属于环节动物门蛭纲无吻蛭目黄蛭科[2]，2015版《中国药典》记载其属于水蛭科动物，干燥全体为中药材水蛭，药性咸、苦、平，有小毒，归肝经具有破血通经，活血化瘀的效果[6-7]。现代诸多的药理实验表明蚂蟥具有抗凝血、抗血栓、抗血小板聚集等药理活性，经常被用于治疗糖尿病、心脏病、肝硬化、高血压、哮喘病等疾病[1]。
    水蛭素是一种单链多肽，由66个氨基酸残基组成，它的相对分子质量大约为 7 000。水蛭素同凝血酶的亲和能力相当强[3]，是目前所能鉴定出的最强的凝血酶特异性抑制剂[4]。水蛭素能够降低蛋白尿,改善肾功能,降低血脂,具有抗凝抗血栓成、改变血液流变性、抗炎、抗增殖和抗纤文化等多种药理活性[28]，对治疗心脑血管疾病、动脉粥样硬化、败血休克、高血压及缺少抗凝血酶Ⅲ因子的疾病等方面具有巨大的优越性和广阔的应用前景[26-27]。水蛭素中还含有抗炎酶，是其产生抗炎作用的主要原因。
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