摘要H7N9 禽流感自打出现以来给人们的健康带来了巨大的威胁，也给世界养禽 业带来堪称灾难级的打击，有一个 H7N9 出现了，就会有下一种禽流感在人类之 间传播，所以 H7N9 的基因研究势在必行，本实验通过全基因合成法 PCR 扩增 出 H7N9 基因，通过蓝白斑筛选法筛选出含 H7N9 基因的宿主细胞，利用质粒抽 提技术批量提取包含 H7N9 基因的质粒。初步探索一种重复性好、错误率低、低 成本和简便的基因设计和全合成方法同时批量提取了 H7N9 基因。 82338

毕业论文关键词：全基因合成 H7N9 PCR 蓝白斑筛选 质粒大抽

Abstract Since H7N9 bird flu has appeared,it has brought great threat for people’s health, also brought the hit to the world poμLtry industry which coμLd called disaster, a H7N9 appeared,  there  will  also  be  an another  bird flu  spread  among humans,    so

H7N9’s gene research is imperative。 This paper aims to total gene synthesis method of PCR amplified H7N9 gene, through the blue white screening method selected host cell containing H7N9 gene, with Plasmid Extraction Technology of batch extraction of plasmid containing H7N9 gene。 In the process of synthesizing H7N9, a kind  of gene design with good repeatability, low error rate, low cost and simple gene design and complete synthesis method is explored。

Keywords: gene synthesis of H7N9 and its connection ;translation;filtering ; extraction Plasmid Extraction

目 录

第一章 绪论 1

1。1 禽流感概述 1

1。1。1 禽流感 1

1。1。2 H7N9 禽流感 2

1。2 基因工程技术 2

1。2。1 基因工程概述 2

1。2。2 基因合成技术研究进展 3

1。2。3  长链 DNA 和基因组合成技术 4

1。3 研究原理 4

1。3。1 重组质粒转化和抽提实验原理 4

1。3。2 筛选和鉴定目的克隆的方法 4

第二章 实验材料和方法 6

2。1 实验材料与仪器 6

2。1。1 实验仪器 6

2。2。2 主要试剂 7

2。2 实验方法 7

2。2。1 确定 PCR 反应的要素 7

（4）dNTP 9

2。2。2 引物的设计以及分段 9

2。3 PCR 反应体系及扩增 11

2。3。1  引物的稀释 11

2。3。2 第一轮 PCR 反应 11

2。3。3 第二轮 PCR 反应 12

2。3。4 PCR 产物的回收 12

2。4 目的基因以及载体的连接及转化 13

2。4。1 载体酶切 13

2。4。2 连接 13

2。4。3 制备感受态细胞 14