细胞贴壁长满后就应该进行消化处理了。细胞消化与细胞换液的前期准备工作差不多,培养液、PBS和胰酶都要在37℃进行预热处理,超净工作台也要开30min的紫外进行杀菌不同的是在超净工作台中的操作,细胞从培养箱中取出于超净台上倒出培养瓶中的培养液,然后用PBS洗两次,值得注意的是第二次用PBS洗时一定要将PBS倒干净,否则会影响消化效果。然后加1ml胰酶放入培养箱进行消化约30s左右,取出置于导致显微镜中观察细胞是否变圆,如果变圆则说明已经消化好了,立即在超净台上将培养瓶中的胰酶倒出,盖上盖子拍培养瓶的上面和左右面,然后加入1ml的培养液,这一次培养液要沿着细胞贴壁面加入,把贴在瓶壁上的细胞冲下来若第一次未能把所有的细胞冲洗下来可将瓶内的细胞液吸取多冲几次,再轻轻吹打使细胞混匀,最后留取适量细胞液加4ml的培养液,水平的前后晃动培养瓶,使细胞与细胞液混和均匀继续培养。实验完成后可在倒置显微镜中观察细胞。
每次实验完成后都要将培养液、PBS和胰酶放回4℃冰箱中保存;废液缸要清理干净;在超净工作台面用酒精面擦一遍用过的仪器也要擦一遍。