因多态性与 EH 关系的人群研究尚未见报道。本研究通过分析 ADCY3 基因的 12 个标签单 核苷酸多态性（tag SNPs），了解 ADCY3 基因位点在中国人群中的分布频率，分析其与 EH 遗传易感性的关联。

2。材料与方法

2。1 研究对象选取

采取病例对照研究，以浙江省宁波市某区作为研究现场，随机抽取 4 个乡镇作为调查点， 以 2013 年 4～7 月参加现场调查点健康体检、年龄≥40 岁、无血缘关系的汉族当地常住居 民为研究对象。

病例的选择：高血压组纳入标准参照 2010 年《中国高血压防治指南》中的高血压定义，

即在未用抗高血压药情况下，收缩压（SBP）≥140mmHg 和/或舒张压（DBP）≥90mmHg， 或者患者既往有高血压史，目前正在应用抗高血压药物治疗。还应排除继发性高血压、糖尿 病、甲状腺疾病、严重肝肾疾病、严重下肢静脉曲张、心力衰竭、房颤、心肌梗死或脑卒中、 严重的心律失常等心脑血管疾病及恶性肿瘤患者。对照的选择：对照组纳入标准为血压

<140/90mmHg 且未曾服用过任何抗高血压者，且要排除糖尿病、甲状腺疾病、严重肝肾疾 病、严重下肢静脉曲张、心力衰竭、房颤、心肌梗死或脑卒中、严重的心律失常等心脑血管 疾病及恶性肿瘤患者。

按照非匹配的病例对照研究样本量公式计算本研究所需的样本量，设置信度为 95%（即 α =0。05），把握度为 95%（即β =0。05）， 对照组与病例组人数比例为 1，对照组的期望暴 露率为 40%，OR 值为 1。45，得病例组和对照组人数分别为 767 和 767 人。本研究最终获得 符合条件的病例组和对照组人数分别为 1061 和 1218 人，满足研究需求。

2。2 研究方法

2。2。1 流行病学调查 调查前研究对象同意并签署知情同意书，后由经统一培训过的调查员以面对面的方法采

用统一编制的问卷进行调查。调查内容主要包括：①一般人口学资料（包括姓名、性别、年 龄、职业、文化程度等）；②生活行为方式（吸烟、饮酒、体育锻炼等）。其中，吸烟定义为 平均每日吸一支及以上并连续吸烟 1 年及以上。饮酒定义为平均每日饮白酒≥50 g，或红酒文献综述

≥150 g，或啤酒≥500 g，且持续饮 1 年及以上。体育锻炼指每周参加两次及以上的日常活

动以外的身体锻炼。此外，通过体检获得身高、体重、腰围、臀围、血压和血脂等指标。由 护士采集研究对象的空腹外周静脉血 5ml，置于 EDTA 抗凝管中，放-80℃冰箱低温冻存备 抽提 DNA。

2。2。2 位点选择

基于 Hapmap 数据库（http: //hapmap。ncbi。nlm。nih。gov/）获得的 ADCY3 基因组遗 传变异资料，采用 Haploview 软件确定其多态位点的分布频率，利用 Tagger 功能，按照 在中国人群中最小等位基因频率大于 5%，并且与区段内其他 SNP 的连锁不平衡系数均大 于 0。8 的原则，对其 Tag SNP 进行筛选，最终共筛选出 12 个 Tag SNP，详见表 1。

2。2。3 实验室检测

由上海捷瑞生物工程有限公司的专业技术人员采用酚-氯仿法进行 DNA 抽提，采用连 接酶检测反应技术（ligase detection reaction，LDR）进行 SNP 分型检测，实验采用到的 引物和探针序列详见表 1。实验过程如下：

（1）PCR 扩增：采用东胜 EDC- 810PCR 仪进行，扩增体系包括：DNA 样本 1ul， 10×PCR 缓冲液 1。5 ul，25 mmol/L MgCl2 1。5 ul，10mmol/L dNTP 0。3ul，10pmol/ul PCR 引物 0。15 ul/条，5U/ul Taq 酶 0。3 ul，加 ddH2O 至 15 ul。扩增条件为：94℃变性 3min； 94℃ 15s，55℃ 15s，72℃ 30s，循环 35 次；72℃退货火延伸 3min。