1.3  LPS诱导的炎症信号传导机制

1.3.1  细菌内毒素性致病

细菌内毒素性致病是一个发病环节十分复杂的病理过程，致病作用非常广泛。内毒素休克是临床常见的危重病症，常并发于感染、创伤、烧伤、放射损伤及失血性休克等，死亡率高达30%-60%[19]。内毒素是一种革兰氏阴性细菌细胞壁的组成成分，只有在细菌死亡或繁殖时，才释放到胞外，发挥各种效应。菌体成分如细菌基因组DNA和存在于革兰阴性细菌外膜的脂多糖毒素(LPS)等在细菌感染导致的急性炎症反应中起着关键作用，有很强的生物刺激活性，能够破坏肠道正常的肠粘膜屏障，导致大量LPS进入血液循环，并引起炎症信号的级联传导或瀑布反应，诱导多种炎症介质过度释放，是导致感染和中毒性休克乃至患者死亡的重要原因之一[20]。

1.3.2  LPS及其诱导的信号通路

脂多糖（lipopolysaccharide ，LPS）是革兰氏阴性菌的细胞壁组成成分，主要是由亲水性的多糖（O-特异性多糖、核心多糖）及疏水性的类脂A构成，其中类脂A是它的毒性部分，与细菌的致病有关。 LPS的免疫刺激作用最强，可刺激几乎所有的真核细胞发生形态、代谢和基因表达变化，导致宿主细胞因子失控性表达，介导严重感染。LPS刺激免疫细胞，促使其过量分泌细胞因子特别是肿瘤坏死因子（TNF-）、白细胞介素-1 (IL-1)、白细胞介素-6 (IL-6) 等，并可导致多个要害器官的衰竭，临床上主要表现为呼吸急促、持续高热、寒战，同时伴有心、脑、肾、肝等实质细胞的变性或坏死，严重时甚至出现中毒性休克[21-23]。源'自:优尔:"论-文'网www.youerw.com

随着人们对于LPS诱导细胞因子及炎性介质产生的机制研究深入， LPS诱导的炎症信号传导机制已较为清晰。研究表明，LPS可以通过激活单核巨噬细胞内NF-B、TBK1-IRF3、MAPKs (包括ERK, JNK, 以及p38)、JAK2-STAT1等多条信号转导通路来诱导合成 TNF-、PGE2 、NO等炎症介质的释放量。[17-18] 本实验将通过检测这些炎症因子及信号通路上游的相关基因mRNA和蛋白的表达量，以研究分析药物抗炎的分子机制。

2  方法与材料

2.1  试剂与仪器

实验试剂：药物单体Apigenin glucuronoside从杜仲中提取；吲哚美辛, 噻唑蓝（MTT），聚乙烯亚胺， Polyethylenimine (PEI)，羧甲基纤维素钠 (Na CMC），LPS(E.coli 0111:B4) 均为Sigma-Aldrich 公司产品；胎牛血清(Fetal bovine serum，FBS) 和RPMI 1640购自Gibco公司（Grand Island NY, USA）；RAW264.7细胞购自 ATCC (Rockville, MD,USA)；其他试剂均为分析纯。免疫印迹法检测总蛋白或磷酸化形式蛋白含量中所用的特异性抗体细胞外信号调节激酶（ERK）,c-Jun氨基末端激酶（JNK），P38，IB和-actin均购自Cell Signaling Technologies (Beverly, MA, USA) 和Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA)。

实验仪器：酶标仪（Infinite M200 Pro），紫外分光光度计（配计算机）（UV757CRT），二氧化碳培养箱（日本三洋）。