3.1.4 醇脱氢酶碱基长度 13

3.2 实验内容 13

3.2.1PE 基因组和 PET-28a 载体质粒的提取 13

3.2.2 目的基因的获取 14

3.2.3 目的基因的酶切反应 14

3.2.4 质粒酶切反应 15

3.2.5 目的基因的表达 15

3.2.6 菌落 PCR 鉴定 16

3.2.7T 载体连接转化 16

4 结果与讨论 19

4.1 实验结果 19

4.1.1PE 基因组的提取结果 19

4.1.2 醇脱氢酶的制备结果 19

4.1.3 菌落 PCR 鉴定结果 20

4.1.4T 载体的连接结果 21

4.1.5T 载体连接的酶切结果 22

4.1.6TA 克隆法的重组表达结果 23

4.2 结果讨论 23

5 总结与展望 25

6 致谢 26

7 参考文献 27

8 附录 29

8.1 醇脱氢酶的核酸序列比对图 29

8.2 DNA Marker 大小比对图 36

1 研究背景

1.1 手性合成的简介

在人类悠长的进化史中，手性化合物扮演着非常重要的角色，由于生命的衍变，生物 体内的很多物质如一些小分子蛋白质、大分子核酸、酶等都形成了独特的手性结构，使人 体能够对一些外来的手性药物分子产生不同的机理反应，导致那些拥有特异光学活性的手 性药物分子表现出各自特定的生理作用和毒副作用。即便是同一种化合物，它的两种对映 体在生物体内发挥的药效、毒副作用以及功能上面都大不相同，例如(S)-型多巴可以有效 的治疗帕金森综合症，是治疗此类患者的重要药物，但是(R)-型多巴的服用却能够减少人 体内的粒状白细胞，这种构型的使用对人类的生命健康造成极大危害；(S)-型的普萘洛尔 可以治疗心脏病患者，是一种快速长效的 β-受体阻断药，而(R)-型的普萘洛尔药理作用完 全不同，它能够起到避孕药的作用[1]。

手性药物之所以能发挥其药理活性，是因为它能够与人体内的大分子物质如具有特殊 作用位点的受体之间进行精确的识别作用，再相互配对结合，对映体不同的药物所表现出 来的药理活性天差地别，所谓的手性制药即是利用这种原理来设计合理高效的工艺路线以 研发出药效良好、毒副作用小、纯度高的手性药物[2]。在临床应用方面，手性药物不仅能 够排除一些没有效果或效果不好且对生物体有较大毒副作用的药物的使用，而且能有效的 减少因剂量和没有药理活性的对映异构体对人体所造成的非必要的代谢负担，因此研发高 纯度的对映体手性药物至关重要，它未来的应用价值和经济效益不可估量[3]。

随着手性药物的发展，光学活性纯的单一对映体的概念逐渐被发现，早在 1984 年， 药理学家们就提出要将手性药物以单一对映体的形式上市，全力倡导世界各药政部门对光 学活性相差甚大的手性药物分子做出相应的管理策略和使用规定。1992 年 5 月，美国 FDA 对此提出了新规定，为了有效的寻找药物剂量与效应的平衡点，应该避免对映体手性药物 的服用。此外，也可以以手性药物的消旋体形式去申请药物，但是必须将消旋体的所有对 映体都进行单独测试，综合各方面的结果来判断哪种对映体制成的手性药物在治疗疾病时 可以更加安全且更加有效 [4]。为了满足光学活性纯的单一对映体的手性药物日益渐大的 应用需求，它必须以更快的发展速度向大家问候，尤其在全球新药上市中占有很大的比例。 埃切毕赤酵母醇脱氢酶的克隆及重组表达(2):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_74116.html