2.3.8 免疫荧光组织化学技术检测小鼠肝脏4-HNE水平

(1) 组织切片以PBS洗3次，每次5分钟；

(2) 封闭液封闭1小时；

(3) 弃封闭液，滴加配制好的一抗[rabbit anti-4-hydroxynonenal (4-HNE) antibody 1:100]，4℃孵育过夜；

(4) PBS洗3次，每次5分钟；

(5) 组织切片在荧光标记二抗[Texas Red-conjugated anti-rabbit IgG 1:200]  

稀释液中孵育1.5小时，室温,避光；文献综述

(6) PBS洗3次，每次5分钟；

(7) 滴加DAPI染液，室温孵育5-10min；

(8) 滴加抗淬灭剂

(9) 盖上盖玻片置于荧光显微镜下观察，采集图像。

(10) 用图像分析软件Image Pro-Plus 6.0进行光密度分析。

2.3.9 数据统计分析

使用SPSS软件11.5版本对各组数据进行统计分析，用单因素方差分析，以均数±标准差( x ± s) 表示，组间比较用Tukey's honestly significant difference( HSD) post hoc test进行分析，以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

3.  结果与分析

3.1 BDE-47及曲克芦丁对小鼠体重的影响

                               表3-1 小鼠体重

组分 0周 12周

Control

BDE-47

BDE-47+Troxerutin

Troxerutin 33.35±0.74

33.12±0.29

33.39±0.58

33.51±0.56 38.06±1.52

39.20±1.28

38.45±2.01

37.23±1.05

             处理12周后，各处理组小鼠的体重均无显著差异。

3.2 BDE-47对小鼠肝脏损伤的影响及曲克芦丁的保护作用

表3-2 小鼠肝脏系数和ALT的变化

组分 肝脏系数（g/100g） ALT( U/L)

Control

BDE-47

BDE-47+Troxerutin

Troxerutin 4.67±0.27

8.77±0.64***

5.36±0.49###

4.39±0.28### 45.96±6.87

93.08±9.33***

52.38±7.76###

40.19±6.97###

* P<0.05, *** P<0.001为与对照组相比；###为与BDE-47处理组相比P<0.001   

由表3-2结果显示，BDE-47处理后，小鼠的肝脏系数和ALT活力水平与对照组相比有显著提高（P<0.05）；曲克芦丁处理使BDE-47组的肝脏系数和ALT水平明显下降，并与对照组无显著性差异；曲克芦丁组与正常组无显著性差异。来!自~优尔论-文|网www.youerw.com

 H&E染色

箭头所示为炎症细胞，放大倍数：200×

HE染色的结果显示：BDE-47处理可导致小鼠肝脏产生明显的组织病理学改变，如肝脏实质细胞肿胀及空泡化，肝小叶中炎症细胞浸润等(图 3-1)。曲克芦丁处理可有效改善BDE-47导致的小鼠肝脏组织病理学改变，与正常对照组相比无明显差异(图3-1)。

3.3 BDE-47对小鼠氧化损伤的影响及曲克芦丁的保护作用

ROS的含量检测结果显示：BDE-47处理能够使自由基ROS的含量明显升高，差异具有统计学意义（P<0.05）；曲克芦丁能够使自由基ROS含量恢复到对照组水平；曲克芦丁组与对照组含量无明显差异。