3。1 MTT法检测GSNO对CNE-2细胞增殖的影响 7

3。1。1 不同浓度GSNO处理不同时间对CNE-2生长增殖的影响 7

3。1。2 NO清除剂对GSNO处理的CNE-2细胞生长增殖的影响 7

3。1。3 GSNO对人鼻咽癌CNE-2细胞和人永生化鼻咽上皮细胞NP-69存活率的影响 8

3。2 GSNO作用于CNE-2细胞的形态学观察 9

3。2。1 倒置显微镜观察 9

3。2。2 荧光显微镜观察 9

4 讨论 10

参考文献 11

致谢 12

1 引言

鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma, NPC)是我国高发肿瘤之一,是耳鼻喉科最常见的恶性肿瘤，多见于我国南方地区，其发病率高达25-30/10万人年[1]。鼻咽癌的发病因素与多种致癌因素相关，如EB病毒感染、环境因素、遗传因素、饮食习惯等[2]。目前在临床上治疗鼻咽癌的主要手段中，化疗和放疗联合治疗手段逐渐成为主流，顺铂辅助化疗和放疗也已经成为治疗鼻咽癌的标准疗法[3]。目前临床使用的化学药物虽然在肿瘤治疗方面取得一定的疗效，但远期效果不理想并存在有严重的毒副反应。因此，发现新的肿瘤治疗靶点很有必要，也成为近年来是肿瘤研究的热点之一[4]。

自Hibbs发现由活化的巨噬细胞产生的NO是杀伤肿瘤细胞的毒性效应因子以来，己经有大量资料证明，NO在肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭、转移及凋亡中也起着重要作用[5-9]。一氧化氮(nitric oxide，NO)是一种自由基性质的气体，分子小，可溶于水，具亲脂性，可穿透生物膜。一氧化氮可作用于细胞内的靶分子而参与一系列生理和病理条件下的生物过程，调节免疫、神经、循环等一系列生理活动，如宿主防御反应、血管通透性、血管扩张、神经信号传递等[10-16]。内源性NO是一种极不稳定的化合物，在实验条件下，其半衰期仅为3-5s，对研究其功能带来不便。S—亚硝基谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione GSNO)比NO稳定，半衰期长，具脂溶性，可穿透细胞膜进入细胞并释放一氧化氮，进而使NO发挥其生物学活性[17]。

本研究以NO供体巯基亚硝基谷胱甘肽(GSNO)作为工具药，以已构建的人鼻咽癌细胞（Human nasopharyngeal carcinoma cell, CNE-2)为模型，研究GSNO对CNE-2细胞增殖的影响。

2 材料与方法

2。1 实验材料

CNE-2细胞株系由浙江医院馈赠；NP69细胞株系购自上海拜力生物科技有限公司

2。2 实验试剂

还原性谷胱甘肽（GSH）购自上海晶纯生化科技股份有限公司；40% NaOH；0。2 M HCL；400 mM NaNO2；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司；改良型RPMI-1640培养液；0。25%胰酶购自Gibco公司；二甲基亚砜( DMSO) 购自美国Sigma公司；N—乙酰半胱氨酸（N—Acetyl—L—cysteine，NAC）购自上海晶纯生化科技股份有限公司； MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒购自凯基生物材料有限公司；其余试剂均为国产分析纯。论文网